Resumo: Para o controle dos danos induzidos pelo vírus da tristeza dos citros, adotou-se o uso de porta-enxertos tolerante e a pré-imunização, que utiliza isolados fracos do Citrus Tristeza Virus (CTV) para proteger contra infecções posteriores com isolados severos. Estudos demonstram que isolados fracos selecionados na região de implantação do pomar são superiores em suas características protetivas. Nessa perspectiva, 20 plantas de laranja elite da variedade 'Pêra', que se destacavam das demais pela produção e desenvolvimento, foram selecionadas nas regiões Norte e Noroeste do Estado do Paraná e submetidas à indexação biológica e testes moleculares para detecção de vírus, viróides e bactérias, causadores de doenças em citros. O valor protetivo dos isolados de CTV dessas plantas foi determinado, em uma primeira etapa, por meio da caracterização molecular pelas análises RFLP (restriction fragment length polymorphism) e SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism) do gene da proteína do capsídeo, estabelecendo comparações com isolados fracos e severos conhecidos. Na etapa seguinte, esses isolados potencialmente fracos e protetivos foram submetidos a testes de desafio com a inoculação de isolado severo 'Rolândia' por meio da união de tecido (enxertia) ou pelo vetor 'Pulgão Preto dos Citros' (Toxoptera citricida Kirkaldy). Os resultados mostraram que as plantas selecionadas apresentavam potencial para serem utilizadas em programas de pré-imunização, visto que a indexação biológica e a caracterização molecular através de RFLP e SSCP do gene da capa protéica indicaram a presença de isolados fracos do vírus da tristeza. Dentre esses, alguns isolados se destacavam mostrando um melhor valor protetivo frente ao desafio com isolados severos, evidenciado pela análise SSCP das plantas desafiadas e mantidas em estufa. A análise molecular SSCP mostrou ser uma excelente ferramenta complementar a experimentos de desempenho a campo para se monitorar a estabilidade do complexo viral presente nas plantas. A avaliação dos isolados através da análise SSCP e em experimento a campo apontou o isolado número 1, coletado no Município de Cruzeiro do Sul (CS-1), como o isolado mais promissor e que pode oferecer melhor proteção a plantas de laranja 'Pêra' em pomares comerciais implantados no Norte e Noroeste do Paraná. O isolado severo do CTV, denominado Rolândia, mostrou-se estável e com alta divergência genética em relação aos demais isolados severos utilizados (Capão Bonito e Barão B) e a todos os isolados testados.
Abstract: For the control of the damages induced by the Citrus tristeza virus (CTV), it was adopted the use of tolerant rootstock and the pre-immunization, which uses mild CTV isolates to protect against subsequent infections with severe isolates. Studies have demonstrated that selected mild isolates in the region of orchard are superior in their protective characteristics. In this perspective, 20 plants of elite 'Pêra' sweet orange, which have been standing out for their production and development were selected in the North and Northwest regions of the State of Paraná and subjected to the biological indexation and molecular tests for detection of virus, viroides and bacteria, responsible for the diseases in citrus. The protective value of the isolates of CTV of those plants was determined, in a first stage, through the molecular characterization by the RFLP analyses (restriction fragment length polymorphism) and SSCP (Single Strand Conformational Polymorphism) of the gene of the capsid protein, establishing comparisons between mild and severe isolates. In the next stage, those isolates potentially mild and protective, were subjected to challenge tests with the inoculation of severe isolate 'Rolândia' through the union of tissues (grafting) or through the vector 'Brown citrus aphid' (Toxoptera citricida Kirkaldy). The results showed that the selected plants presented potential to be used in pre-immunization programs, and biological indexation and the molecular characterization through RFLP and SSCP of the gene of the capsid protein indicated the presence of mild isolates of the virus. Among those isolates, some stood out, showing a better protective value, front to the challenge with the severe isolate, evidenced by SSCP analysis of the plants kept in greenhouse. The molecular analysis SSCP showed to be an excellent complementary tool to experiments of field performance, in order to monitor the stability of the viral complex presented in the plants. The evaluation of isolates through the SSCP analysis and in field experiment, showed the isolate number 1, collected in the Cruzeiro do Sul County (CS-1) as the most promising isolate to the protection of 'Pera' sweet orange on commercial orchards located in northern and northwestern of Paraná. The severe isolate of the CTV called Rolândia, showed itself stable and with high genetic divergence among the others severe isolates used (Capão Bonito and Barão B), as well as all the isolates tested. |