Resumo: O Bean rugose mosaic virus (BRMV) pertence ao gênero Comovirus, possui genoma constituído de duas moléculas de RNA fitas simples, senso positivo, denominadas de RNA1 e RNA2 e apresenta gama de hospedeiras restrita, nas quais induz sintomas sistêmicos de mosaico, bolhosidade e deformação foliar no feijoeiro. Plantas de soja e de feijão apresentando sintomas característicos de infecção por BRMV foram coletadas no Paraná. Os isolados foram mantidos em casa de vegetação em plantas de feijoeiro cv. Rio Tibagi. Os isolados foram purificados, permitindo a constatação da presença de três picos de leitura de absorbância que puderam ser correlacionados aos componentes virais de Comovirus. Ensaios de Elisa indireto apontaram para diferenças na concentração relativa individual de cada isolado, a qual se manteve inalterada mesmo nas infecções mistas. O RNA dos isolados foi extraído e um protocolo de semi-nested RT-PCR foi utilizado na amplificação de um fragmento de 700pb do RNA1, o qual foi clonado e sequenciado. Comparações com outras sequências do Genbank indicaram uma identidade de 79% dessa seqüência com o RNA1 do Bean pod mottle virus. Através da identificação da tríade de aminoácidos GDD, que é conservada nas replicases dos vírus de RNA senso positivo, foi identificada a região conservada da RNA polimerase, codificada pelo RNA1 do BRMV. A análise filogenética permitiu a classificação do BRMV como membro da família Secoviridae, agrupando-o próximo ao BPMV, bem como de outros comovírus de leguminosas. A sequência da região 3' do RNA1 do BRMV encontra-se depositada no GenBank sob o código de acesso GU205154 ou gi284807373.
Abstract: Bean rugose mosaic (BRMV) is a member of the Comovirus genus. The virus genome consists of two molecules of single strand RNA, positive sense, called RNA1 and RNA2. BRMV has a restricted host range, causing systemic symptoms such as blistering and leaf deformation on beans. Soybean and bean plants showing characteristic symptoms of BRMV infection were collected in Paraná state. The isolates were maintained in 'Rio Tibagi' bean plants in greenhouse conditions. The virus purified preparation gave three peaks of absorbance readings that could be correlated to the comoviruses particle components. Indirect ELISA tests pointed to replication differential rates for each virus isolate that remained constant even after virus mixed infections. The RNA of both isolates was extracted and a protocol for semi-nested RT-PCR was used to amplify a RNA1 fragment of 700bp, that was cloned and sequenced. Comparisons of the nucleotide sequence with others from the Genbank showed 79% identity with RNA1 of Bean pod mottle virus. The identification of the RNA polymerase coded by BRMV RNA1 was confirmed through the GDD amino acid triad that is conserved in the RNA replicase of all positive sense viruses. The phylogenetic analysis allowed the classification of BRMV as a member of the Secoviridae family. BRMV could be situated next to BPMV, among other comoviruses infecting leguminosae plants. The sequence of the 3' RNA1 region of BRMV is deposited in the GenBank under the accession number GU205154 or gi284807373. |