Resumo: Fitoplasmas são procariotos sem parede celular e parasitas obrigatórios do floema, causadores de doenças em diversas culturas agronômicas. Plantas de Vernonia spp., família Asteraceae, com sintomas de clorose e superbrotamento foram encontradas em áreas de pastagens do município de Patos de Minas, Minas Gerais, e, posteriormente, em plantas ocorrentes em pastagens de Piracicaba, São Paulo e de Maringá, Paraná. O objetivo do presente trabalho foi detectar e identificar fitoplasmas possivelmente associados a estes sintomas. Para isso, o DNA total das plantas foi submetido ao teste de duplo PCR, empregando-se primers universais para a detecção e primers específicos para identificação de fitoplasmas. Produtos amplificados pelos primers universais revelaram a presença de fitoplasmas em 42,66% das plantas coletadas. O uso de primers específicos demonstrou a ocorrência de fitoplasmas afiliados ao grupo 16SrIII. Análises de RFLP virtual, baseadas na digestão enzimática da sequência nucleotídica do 16S rDNA e análises filogenéticas permitiram classificar estes fitoplasmas como membros dos subgrupos 16SrIIII-B e 16SrIII-J. Também foi identificado um fitoplasma do grupo 16SrVII, o qual se mostrou distinto dos representantes dos demais subgrupos até agora descritos para este grupo. Observações realizadas em microscópio eletrônico de varredura e de transmissão evidenciaram a presença de corpúsculos pleomórficos típicos de fitoplasmas no floema das plantas sintomáticas, confirmando os resultados da detecção molecular.
Abstract: Phytoplasmas are prokaryotic cell wall and mandatory phloem parasites, disease causing in various agronomic crops. Plant Vernonia spp., Asteraceae family, with symptoms of chlorosis and overbudding were found in pastures in the city of Patos de Minas, Minas Gerais, and subsequently occurring in plants in pastures of Piracicaba, São Paulo and Maringa, Parana. The objective of this study was to detect and identify phytoplasmas possibly associated with these symptoms. For this, total DNA of the plants was subjected to double PCR assay employing universal primers for specific detection and identification phytoplasms primers. Products amplified by the universal primers revealed the presence of 42.66% of phytoplasms collected in plants. The use of specific primers showed the occurrence of phytoplasmas affiliated to group 16SrIII. Virtual RFLP Analyses based on enzymatic digestion of the 16S rDNA nucleotide sequence and phylogenetic analysis allowed classifying these as members of phytoplasms 16SrIIII-B and J-16SrIII subgroups. Also identified a phytoplasma group 16SrVII, which was quite distinct from representatives of other subgroups so far described for this group. Observations at scanning electron microscope and transmission revealed the presence of corpuscles typical pleomorphic phytoplasmas in the phloem of symptomatic plants, confirming the results of molecular detection. |