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Ttulo [PT]: Utilizao de crioprotetores intra e extracelulares em embries de pacu (Piaractus mesopotamicus)
Autor(es): Patrcia Ribeiro Neves
Palavras-chave [PT]:

Pacu. (Piaractus mesopotamicus). Reproduo. Peixe de gua doce. Embries. Criopreservao. Crioprotetores. Injrias celulares. Microscopia eletrnica de varredura. Preservao morfolgica. Brasil.
Palavras-chave [EN]:
Pacu. (Piaractus mesopotamicus). Reproduction. Freshwater fish. Embryos. Cryopreservation. Cryoprotectants. Cellular injury. Scanning electron microscopy. Morphological preservation. Brazil.
rea de concentrao: Produo Animal
Titulao: Doutor em Zootecnia
Banca:
Ricardo Pereira Ribeiro [Orientador] - UEM
Maria Raquel Maral Natali - UEM
Lauro Daniel Vargas Mendez - UEM
Danilo Pedro Streit Junior - UFRGS
Rodolfo Nardez Sirol - Duke Energy International Gerao Paranapanema S/A
Resumo:
Resumo:O objetivo nesse trabalho foi desenvolver uma metodologia de criopreservao de embries de pacu (Piaractus mesopotamicus) e analisar as injrias causadas nestes embries aps a aplicao de crioprotetores intracelulares, metanol e etilenoglicol nas concentraes de 7%, 10% e l3% e a adio de um crioprotetor extracelular, a sacarose 0,1 M, durante a exposio de 10 minutos, submetidos as tcnicas de congelao e descongelao. Aps a exposio aos crioprotetores foram processados l0 embries em historesina e avaliou-se a preservao morfolgica de acordo com trscategorias para as estruturas embrionarias e extra-embrionrias. os crioprotetores utilizados no alteraram a preservao do crion. A sacarose teve efeito positivo sobre a preservao do vitelo quando comparada aos crioprotetores intracelulares. Maior acidofilia dos grnulos de vitelo indica efeito positivo apenas com a utilizao de sacarose e interao do crioprotetor intracelular e sacarose.Houve efeito positivo com a utilizao da sacarose para as caractersticas de nmero e tamanho dos ncleos presentes na camadas incicial vitelina, com efeito significativo da interao crioprotetor intracelulare sacaose sobreo tamanho dos ncleos' o crioprotetor intracelular etilenoglicol permitiu maior diferenciao das camadas germinativas comparado ao metanol, mas no houve diferena significativa de utilizao da sacarose.A associao do etilenoglicol na concentrao de 7% com a sacarose mostrou ser a melhor combinao de crioprotetores para preservao do vitelo e camadas germinativas de P. mesopotamicus.para a anlise da morfologia embrionria foram envasados e congelados 20 embries/tratamento e aps a descongelao trs embries, em mdia, resultantes desse processo foram includos em historesina, corados com hematoxilina-eosina e analisados em microscpio ptico (Mo). um palhete/tratamento contendo embries foi descongelado e mantidos em incubadora com o objetivo de acompanhar o desenvolvimento , no resultando em ecloso de embries. Amostras de dois embries submetidos aos tratamentos com metanol e etilenoglicol na concentrao de l0% associado ou no a sacarose e os tratamentos gua e gua com sacarose foram processados e analisados em microscopia eletrnica de varredura (MEV). Apesar dos embries apresentarem as estruturas tpicas da fase como,crion, vitelo, camadas inicial vitelina e blastoderme, as mesmas encontravam-se alteradas em 100%dos embries quando analisadas em Mo e MEV. O crion apresentou-se irregular e rompido; ausncia de individualizao dos grnulos de vitelo; a camadas incicial vitelina apresentou formato, espessura e tamanho irregulares e a blastoderme apresentou ncleos alterados no formato e s vezes ausentes, localizada em regies atpicas ou ausentes em alguns embries. Nenhum tratamento foi efetivo para preservao do embrio e conseqente ecloso. Os protocolos utilizados no evitaram a formao de gelo intracelular resultando em alteraes morfolgicas graves durante os processos de congelao e descongelao, inviabilizando os embries P. mesopotamicus.

Abstract: This study aimed to develop a methodology of pacu (Piaractus mesopotamicus) embryos cryopreservation and to analyze the injury cells caused in these embryos after the cryoprotectants intracellulares, methanol and ethylene glycol applications, in concentrations of 7%, 10% and 13% with the addition of an extracellular cryoprotector, the sucrose 0,1 M. After the exposure 10 embryos were processed in historesin and the morphologic preservation was evaluated in agreement with three categories considering the characteristics: chorion, yolk, yolk syncytial layer and germ layers. The used cryoprotectors did not alter the chorion preservation. The sucrose had significant effect on yolk preservation when compared to the intracellulares cryoprotectors. A higher acidophilia of the yolk granules indicated a positive effect only when the sucrose was used and with the interaction of cryoprotector intracellular and sucrose. There was positive effect with the use of the sucrose for the number and size characteristics of nuclei present in the yolk syncytial layer with significant effect of the interaction between intracellular cryoprotector and sucrose on the nuclei size. The intracellular cryoprotector ethylene glycol allowed a higher differentiation of the germ layers when compared to the methanol, but there was not any significant difference in using sucrose. The association of the ethylene glycol in the concentration of 7% with sucrose showed to be the best cryoprotectors combination to the preservation of the yolk and germ layers of Piaractus mesopotamicus. To analyzed embryonic morphology a total of 20 embryos/treatment were fill and frozen and after thawing three embryos, on average, resultants of that process were included in historesin, stained with hematoxilin-eosin and analyzed under optical microscope (OM). A straw/treatment containing embryos was thawed and maintained in incubator with the objective in order to accompany the development, not resulting in embryos outbreak. Samples of two embryos submitted to the treatments with methanol and ethylene glycol in the concentration of 10% associated or not with sucrose and the treatments water and water with sucrose frozen and not frozen were processed and analyzed through scanning electron microscopic (SEM). In spite of the embryos presenting the typical structures of the phase such as chorion, yolk, yolk syncytial layer and germ layers they were altered in 100% when the embryos were analyzed under OM and SEM. The chorion became irregular and broken; absence of individualization of the yolk granules; yolk syncytial layer presented shape thickness and irregular size and the blastoderm presented altered nuclei in the shape and sometimes lacking, located in atypical areas or absent in some embryos. No treatment was effective for embryo preservation and consequent appearance. The used protocols did not avoid the intracellular ice formation resulting in serious morphologic alterations during the freezing and thawing processes, making unfeasible the embryos of P. mesopotamicus.
Data da defesa: 09/05/2008
Cdigo: vtls000165642
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2008
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pereira Ribeiro
Instituio: Universidade Estadual de Maring. Centro de Cincias Agrrias
Nvel: Tese (doutorado em Zootecnia)/
UEM: Programa de Ps-Graduao em Zootecnia

Responsavel: zenaide
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Patrcia R. Neves.pdf
Tamanho: 2288 Kb (2343168 bytes)
Criado: 29-10-2014 15:07
Atualizado: 29-10-2014 15:26
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