Resumo: Indivíduos sadios são colonizados por Staphylococcus aureus desde a amamentação, podendo albergar o micro-organismo na nasofaringe, superfície corporal e na vagina. A partir desses sítios, podem ser veiculados para indivíduos susceptíveis, ocasionando infecções. S. aureus tem sido associado à etiologia das infecções hospitalares e comunitárias e a gravidade da doença depende da expressão de fatores de virulência e do perfil de resistência frente aos antimicrobianos usualmente utilizados na prática clínica. Este estudo teve como objetivo avaliar o perfil fenotípico, genotípico e fatores de virulência de amostras de Staphylococcus aureus isolados de casos clínicos infecção hospitalar e de portadores assintomáticos. Utilizaram-se 147 amostras de S. aureus, estocadas no Laboratório da Universidade Estadual de Maringá, sendo 68 procedentes de casos clínicos de infecção associadas aos cuidados em saúde e 79 de portadores assintomáticos. A susceptibilidade aos antimicrobianos foi avaliada pelo método de disco difusão, conforme recomendações do CLSI, sendo que para oxacilina e vancomicina também se utilizou o teste de determinação da concentração inibitória mínima (CIM). O DNA foi extraído com Ctab e a técnica de Reação em Cadeia da polimerase (PCR) foi empregada para a realização da tipagem genética com o oligonucleotídeo RW3A, identificação do gene mecA, detecção do gene para a produção de PVL e detecção dos genes icaA e icaD. Todas as amostras de S. aureus mostraram um amplo perfil de resistência aos antimicrobianos usualmente empregados na rotina clínica. Através do teste de CIM observou-se que das 68 amostras, clínicas 58 (85%) apresentaram resistência à oxacilina e dessas 55 (95%) carreavam o gene mecA. As 58 amostras de oxacilina resistentes identificadas pelo CIM 55 (98%) também se mostraram resistentes pelo método de disco difusão. Entre as 79 amostras de portadores assintomáticos, 7 (9%) apresentaram resistência à oxacilina pelo método de CIM, e dessas, 6 (86%) expressaram o gene mecA. Para as 7 amostras de portadores resistentes à oxacilina, 6 (86%) apresentaram resistência também pelo método de disco difusão. Entre as amostras isoladas de portadores à resistência, foi de 100% para penicilina e cefoxitina e 0% para linezolida, telitromicina e teicoplamina. Para as amostras clínicas a resistência foi de 100% para penicilina, cefoxitina e telitromicina; e 0% para teicoplamina. Todas as amostras foram sensíveis à vancomicina pelos dois métodos empregados. O gene PVL foi identificado em apenas 1(14%) das 7 amostras oxacilina resistentes isoladas de portadores assintomáticos. O gene icaA e icaD concomitantemente foi detectado em apenas 1 (14%) das 7 amostras oxacilina resistentes procedentes de portadores assintomáticos e em 41(60%) das 68 amostras clínicas. A tipagem genética das 79 amostras de portadores assintomáticos demonstrou que entre 15 delas houve 100% de similaridade e entre 23 o grau de similaridade foi superior a 80%. Para as 68 amostras clínicas, verificou-se que 19 apresentaram 100% de similaridade, 3 tiveram similaridade próxima a 90%, 23 acima de 84% e 19 em torno de 80% de similaridade.
Abstract: Healthy subjects are colonized by the Staphylococcus aureus since breastfeeding and this microorganism can be found in the nasopharynx, skin and vagina. From these areas this bacteria can be transmitted to susceptible subjects causing them infections. The S. aureus has been associated to hospital and community infections whereas the severity of the disease depends on the expression of virulence factors and the resistance profile towards antimicrobial agents applied in clinical practice. The aim of this study was to assess the phenotypic and genotypic profile and the virulence factor of Staphylococcus aureus samples isolated from symptomatic and asymptomatic carriers. Therefore 147 S. aureus samples stored at the Maringá State University Laboratory were used, where 68 were drawn from infection associated with health care cases and 79 were drawn from asymptomatic carriers. The susceptibility to antimicrobial agents was assessed using the disc diffusion method as recommended by the CLSI, and for the oxacillyn and vancomycin resistance the minimum inhibitory concentration (MIC) determination test was also used. The DNA was extracted with Ctab and the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique was applied for the genetic characterization with the RW3A oligonucleotide, identification of the mecA gene, detection of the gene for the production of PVL and detection of the icaA and icaD genes. All S. aureus samples showed a wide range of resistance to the antimicrobial agents often used in clinical practice. The MIC test results showed that from the 68 symptomatic samples, 58 (85%) presented oxacillyn resistance and 55 (95%) of them carried the mecA gene. For the 58 oxacillyn resistant samples identified by the MIC test, 55 (98%) also displayed resistance using the disc diffusion method. Among the 79 asymptomatic carriers samples, seven (9%) were oxacillyn resistant by the MIC test and six (86%) expressed the mecA gene. For the seven oxacillyn resistant samples from asymptomatic carriers, six (86%) also showed resistance by the disc diffusion method. The samples isolated from asymptomatic carriers had 100% resistance for penicillyn and cefoxitin and 0% to linezolid, telithromycin and teicoplamin. The samples isolated from symptomatic cases had 100% resistance for penicillin, cefoxitin and telithromycin and 0% to teicoplamin. All samples were sensitive for vancomycin by both methods applied. The PVL gene was detected in only one (14%) of the seven oxacyllin resistant samples isolated from asymptomatic carriers. The icaA and icaD genes were both detected in only one (14%) of the seven oxacillyn resistant samples isolated from asymptomatic carriers and in 41 (60%) of 68 samples isolated from symptomatic clinical cases. The genetic characterizations of the 79 samples isolated from asymptomatic cariers showed that 15 of them shared a similarity rate of 100% and 23 showed a similarity rate above 80%. From the 68 symptomatic clinical samples, 19 presented a similarity rate of 100% and three shared a similarity rate above 90%, 23 above 84% and 19 shared a similarity rate around 80%.
Resumen: Individuos sanos son colonizados por Staphylococcus aureus desde el periodo de lactancia, pudiendo albergar el microorganismo en la nasofaringe, superficie corporal y en la vagina. A partir de esos sitios pueden ser transmitidos para individuos susceptibles ocasionando infecciones. S. aureus ha sido asociado a la etiología de las infecciones hospitalarias y comunitarias y la gravedad de la enfermedad depende de la expresión de factores de virulencia y del perfil de resistencia frente a los antimicrobianos comumiente utilizados en la práctica clínica. El objetivo de este estudio fue evaluar el perfil fenotípico, genotípico y factores de virulencia de muestras de Staphylococcus aureus aislados de casos clínicos, infección hospitalaria y de portadores asintomáticos. Se utilizó 147 muestras de S. aureus estocadas en el Laboratorio de la Universidade Estadual de Maringá siendo 68 procedentes de casos clínicos de infecciones asociadas con el cuidado de la salud y 79 de portadores asintomáticos. La susceptibilidad a los antimicrobianos fue evaluada por el método de disco difusión, conforme recomendaciones del CLSI, siendo que para oxacilina y vancomicina también se utilizó el test de determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM). El DNA fue extraído con Ctab y la técnica de Reacción en Cadena de la polimerase (PCR) fue empleada para la realización tipaje genética con el oligonucleotídeo RW3A, identificación Del gen mecA, detección del gen para la producción de PVL y detección de los genes icaA e icaD. Todas las muestras de S. aureus mostraron un amplio perfil de resistencia a los antimicrobianos usualmente empleados en la rutina clínica. Através del test de CIM se observó que de las 68 muestras clínicas 58 (85%) presentaron resistencia a oxacilina y de estas 55 (95%) (acarreaban) el gen mecA. Para las 58 muestras oxacilina resistentes identificadas por el CIM 55 (98%) también se mostraron resistentes por el método de disco difusión. Entre las 79 muestras de portadores asintomáticos 7 (9%) presentaron resistencia a la oxacilina por el método de CIM y de estas 6 (86%) manifestaron el gen mecA. Para las 7 muestras de portadores resistentes a oxacilina 6 (86%) presentaron resistencia también por el método de disco difusión. Entre las muestras aislada de portadores a resistencia fue de 100% para penicilina y cefoxitina y 0% para lenezolida, teletromicina y teicoplamina. Para lãs muestras clínicas la resistencia fue de 100% para penicilina, cefoxitina y telitromicina; y 0% para teicoplanina. Todas las muestras fueron sensibles a vancomicina por los dos métodos empleados. El gen PVL fue identificado en sólo 1 (14%) de las 7 muestras oxacilina resistentes aisladas de portadores asintomáticos. El gen icaA e icaD concomitantemente fue detectado en solo 1(14%) de las 7 muestras oxacilina resistentes procedentes de portadores asintomáticos y en 41 (60%) de las 68 muestras clínicas. El tipaje genética de las 79 muestras de portadores asintomáticos demostró que entre 15 de ellas hubo 100% de similitud y entre 23 el grado de similitud fue superior a 80%. Para las 68 muestras clínicas se observó que 19 presentaron 100% de similitud, 3 tuvieron similitud próxima a 90%, 23 (a cima) de 84% y 19 alrededor de 80% de similitud. |