Resumo: A mandioca tem a maior parte de sua produção destinada à alimentação humana por meio do consumo de suas raízes. Por ser propagada vegetativamente, ela está sujeita à disseminação de doenças sistêmicas através de gerações sucessivas, como aquelas causadas por vírus. O vírus do mosaico comum da mandioca (Cassava common mosaic vírus, CsCMV) é o mais disseminado nas áreas produtivas de todo o mundo. O presente trabalho teve como objetivo testar um protocolo de limpeza clonal de mandioca para obtenção de plantas livres do CsCMV, realizar a indexação dos materiais propagativos de variedades cultivadas na região Noroeste do Paraná (Olho Junto, Fécula Branca, Baianinha, IAC 90, IAC 12, IAC 13 e IAC 14) e do material "Pasquini" (variedade não definida), e produzir um antissoro específico para o CsCMV. Testes de ELISAindireto realizados revelaram a infecção natural do CsCMV em todas as variedades de mandioca analisadas. O protocolo utilizado foi eficiente na micropropagação das variedades Olho Junto, IAC-12 e "Pasquini", resultando em plântulas saudáveis prontas para aclimatação, demonstrando assim, a necessidade de adaptação do método para as demais variedades. Constatou-se que, das 64 plântulas de mandioca desenvolvidas in vitro e provenientes da termoterapia associada à cultura de meristemas (independentemente da variedade), 31 se mostraram livres do CsCMV através da indexação pelos testes ELISA realizados. A adição do antiviral Ribavirina ao meio de cultivo MS nas concentrações de 5 a 40 mg/L não se mostrou eficiente nas condições testadas, causando efeitos fitotóxicos e a morte das plântulas das 3 variedades testadas. A purificação do CsCMV foi conseguida, obtendo-se um antissoro altamente específico e com alto título (1:10.000). As purificações das imunoglobulinas G (IgG) específicas para o CsCMV foram, igualmente, bem sucedidas e se mostraram mais sensíveis à detecção do vírus do que o antissoro bruto, quando utilizadas nos ensaios ELISA realizados. A massa molecular da proteína capsidial do CsCMV purificado foi determinada, ficando próximo de 20 KDa e dentro do esperado para Potexvirus. Reações de RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos para Potexvirus resultaram na amplificação de fragmentos de aproximadamente 760 pb, os quais, possivelmente, representem a amplificação parcial do gene codificador da replicase viral.
Abstract: Part of the production of cassava (Manihot esculenta Crantz) is directed towards human feeding through consumption of its roots. Due to its vegetative propagation, it is subject to the dissemination of systemic diseases as those caused by viruses after successive generations. CsCMV is the most disseminated in the cassava producing areas of the world. In this work, a clonal cleaning protocol was evaluated in order to obtain cleaned plants free from CsCMV of the varieties of cassava (Olho Junto, Fécula Branca, IAC 90, IAC 12, IAC 13, IAC 14 e Baianinha) and the material "Pasquini" (non-defined variety) cultivated in the Northwest region of Parana State. A specific antiserum for CsCMV was produced and Indirect ELISA tests revealed the natural infection of CsCMV in all the cassava varieties tested. The micropropagation protocol was efficient for Olho Junto and IAC-12 varieties and also for "Pasquini", resulting in healthy plantlets, which were ready for acclimatization. For the other varieties it is necessary to adapt this method. The results showed that 31 out of 64 cassava plantlets developed in vitro proceeding from thermotherapy associated with meristem tip culture (independently from the variety) were free from CsCMV after indexation tests through ELISA. The addition of Ribavirin to the MS culture medium at the concentrations of 5 - 40 mg/L was not efficient for the conditions tested, causing fitotoxic effects and death of the 3 varieties tested. The CsCMV purification was efficient and a highly specific antiserum with a high titre (1:10.000) was raised. When used in ELISA tests, the prepared purifications of specific G immunoglobulins (IgG) for CsCMV were equally successful and showed to be more sensitive to virus detection than the pure antiserum. The molecular mass of the purified CsCMV coat protein was determined, which was close to 20 KDa and within the expected value for Potexvirus. RT-PCR reactions using specific primers for Potexvirus resulted in the amplification of fragments (around 760 bp), which possibly represent the partial amplification of the viral replicase coding gene. |