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Ttulo [PT]: Limpeza clonal de variedades de mandioca (Manihot esculenta Crantz) e produo de antissoro para o vrus do mosaico comum da mandioca
Autor(es): Patrcia Rosin Carnelossi
Palavras-chave [PT]:

Mandioca (Manihot esculenta Crantz). Vrus do mosaico comum (CsCMV). Cultura de meristemas. Termoterapia. Teste de ELISA-indireto. Purificao. Produo de antissoro.
Palavras-chave [EN]:
CsCMV. Meristem culture. Thermotherapy. Serology. Indirect-ELISA tests.
rea de concentrao: Proteo de Plantas
Titulao: Mestre em Agronomia
Banca:
Eliezer Rodrigues de Souto [Orientador] - UEM
Arildo Jos Braz de Oliveira - UEM
Mrio Takahashi - UNIPAR
Resumo:
Resumo: A mandioca tem a maior parte de sua produo destinada alimentao humana por meio do consumo de suas razes. Por ser propagada vegetativamente, ela est sujeita disseminao de doenas sistmicas atravs de geraes sucessivas, como aquelas causadas por vrus. O vrus do mosaico comum da mandioca (Cassava common mosaic vrus, CsCMV) o mais disseminado nas reas produtivas de todo o mundo. O presente trabalho teve como objetivo testar um protocolo de limpeza clonal de mandioca para obteno de plantas livres do CsCMV, realizar a indexao dos materiais propagativos de variedades cultivadas na regio Noroeste do Paran (Olho Junto, Fcula Branca, Baianinha, IAC 90, IAC 12, IAC 13 e IAC 14) e do material "Pasquini" (variedade no definida), e produzir um antissoro especfico para o CsCMV. Testes de ELISAindireto realizados revelaram a infeco natural do CsCMV em todas as variedades de mandioca analisadas. O protocolo utilizado foi eficiente na micropropagao das variedades Olho Junto, IAC-12 e "Pasquini", resultando em plntulas saudveis prontas para aclimatao, demonstrando assim, a necessidade de adaptao do mtodo para as demais variedades. Constatou-se que, das 64 plntulas de mandioca desenvolvidas in vitro e provenientes da termoterapia associada cultura de meristemas (independentemente da variedade), 31 se mostraram livres do CsCMV atravs da indexao pelos testes ELISA realizados. A adio do antiviral Ribavirina ao meio de cultivo MS nas concentraes de 5 a 40 mg/L no se mostrou eficiente nas condies testadas, causando efeitos fitotxicos e a morte das plntulas das 3 variedades testadas. A purificao do CsCMV foi conseguida, obtendo-se um antissoro altamente especfico e com alto ttulo (1:10.000). As purificaes das imunoglobulinas G (IgG) especficas para o CsCMV foram, igualmente, bem sucedidas e se mostraram mais sensveis deteco do vrus do que o antissoro bruto, quando utilizadas nos ensaios ELISA realizados. A massa molecular da protena capsidial do CsCMV purificado foi determinada, ficando prximo de 20 KDa e dentro do esperado para Potexvirus. Reaes de RT-PCR utilizando oligonucleotdeos especficos para Potexvirus resultaram na amplificao de fragmentos de aproximadamente 760 pb, os quais, possivelmente, representem a amplificao parcial do gene codificador da replicase viral.

Abstract: Part of the production of cassava (Manihot esculenta Crantz) is directed towards human feeding through consumption of its roots. Due to its vegetative propagation, it is subject to the dissemination of systemic diseases as those caused by viruses after successive generations. CsCMV is the most disseminated in the cassava producing areas of the world. In this work, a clonal cleaning protocol was evaluated in order to obtain cleaned plants free from CsCMV of the varieties of cassava (Olho Junto, Fcula Branca, IAC 90, IAC 12, IAC 13, IAC 14 e Baianinha) and the material "Pasquini" (non-defined variety) cultivated in the Northwest region of Parana State. A specific antiserum for CsCMV was produced and Indirect ELISA tests revealed the natural infection of CsCMV in all the cassava varieties tested. The micropropagation protocol was efficient for Olho Junto and IAC-12 varieties and also for "Pasquini", resulting in healthy plantlets, which were ready for acclimatization. For the other varieties it is necessary to adapt this method. The results showed that 31 out of 64 cassava plantlets developed in vitro proceeding from thermotherapy associated with meristem tip culture (independently from the variety) were free from CsCMV after indexation tests through ELISA. The addition of Ribavirin to the MS culture medium at the concentrations of 5 - 40 mg/L was not efficient for the conditions tested, causing fitotoxic effects and death of the 3 varieties tested. The CsCMV purification was efficient and a highly specific antiserum with a high titre (1:10.000) was raised. When used in ELISA tests, the prepared purifications of specific G immunoglobulins (IgG) for CsCMV were equally successful and showed to be more sensitive to virus detection than the pure antiserum. The molecular mass of the purified CsCMV coat protein was determined, which was close to 20 KDa and within the expected value for Potexvirus. RT-PCR reactions using specific primers for Potexvirus resulted in the amplification of fragments (around 760 bp), which possibly represent the partial amplification of the viral replicase coding gene.
Data da defesa: 24/02/2010
Cdigo: vtls000182113
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2010
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Eliezer Rodrigues de Souto
Instituio: Universidade Estadual de Maring. Departamento de Agronomia
Nvel: Dissertao (mestrado em Agronomia)/
UEM: Programa de Ps-Graduao em Agronomia

Responsavel: inez
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Patrcia Rosin Carnelossi Verso definitiva.pdf
Tamanho: 8544 Kb (8749100 bytes)
Criado: 17-02-2011 08:14
Atualizado: 17-02-2011 08:36
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