Resumo: A taxa de crescimento das aves está atrelada à eficiência alimentar e a deposição de massa muscular bem como, às condições ambientais a que os animais são expostos. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar o ganho de peso e conversão alimentar das aves, a expressão de genes mitocondriais participantes da síntese de energia, mRNA UCP (proteína desacopladora), mRNA ANT (transportador de nucleotídeos de adenina) e mRNA COXIII (citocromo c oxidase subunidade III), e a expressão de genes envolvidos no crescimento animal, mRNA GHR (receptor do hormônio do crescimento) e do IGF-I (fator de crescimento semelhante a insulina I) no fígado e músculo do peito de frangos de corte, alimentados com dietas contendo duas fontes e dois níveis de suplementação de metionina, e avaliar a influência do estresse térmico agudo sobre a produção de ROS mitocondrial e atividade da enzima glutationa peroxidase no fígado de codornas de corte. Foram utilizados frangos de corte de 22 a 42 dias de idade distribuídos em cinco tratamentos (dieta basal, primeiro nível de suplementação de DLmetionina, segundo nível de DL-metionina, primeiro nível de MHA-FA e segundo nível de MHA-FA). Ao final do período experimental, as aves foram abatidas por deslocamento cervical, o músculo do peito e fígado foram coletados para extração do RNA total. O cDNA foi amplificado usando primers específicos para os genes analisados pela qRT-PCR. Foram mais eficientes na conversão alimentar as aves que receberam suplementação do segundo nível de suplementação de metionina, independente da fonte comercial utilizada. Já, o melhor ganho de peso foi observado no segundo nível de suplementação de DL-metionina. Foi observado significativamente menor quantidade de mRNA UCP no músculo dos animais que consumiram dieta com adição de metionina, sendo a maior expressão deste gene observada para dieta basal, tratamento que também foi responsável pela pior eficiência alimentar. A expressão de mRNA UCP no fígado, e de mRNA COX III e mRNA ANT no fígado e no músculo não sofreram ação da suplementação de metionina. A expressão dos genes GHR e IGF-I no músculo não sofreu influência da suplementação de metionina. Entretanto, no fígado, foi observada diferença significativa entre os tratamentos basal e segundo nível de DLmetionina sobre a expressão de mRNA GHR. Os animais que receberam esse nível de suplementação apresentaram maior expressão do gene. A expressão de IGF-I no fígado foi maior para animais que receberam suplementação de metionina, comparados à dieta basal. A suplementação do segundo nível de DL-metionina também levou à maior expressão em relação àqueles animais alimentados com o primeiro nível de suplementação de DL-metionina (1,56 UA vs 0,97 UA). A suplementação de metionina melhorou o ganho de peso e a eficiência alimentar, como era esperado, em parte, por influenciar a expressão de genes envolvidos nestas características. Para avaliação da produção de ROS e da atividade da enzima glutationa peroxidase, aos 30 dias de idade, codornas de corte foram divididos em dois grupos: os animais pertencentes ao tratamento termoneutro foram abatidos imediatamente e o segundo grupo foi submetido ao estresse térmico de 34oC por 24 horas. Para análise de produção de ROS, foram coletados os fígados para isolamento de mitocôndrias e subsequente análise de ROS mitocondrial. Atividade da enzima glutationa peroxidase foi determinada utilizando peróxido de hidrogênio (H2O2), e baseada na quantidade de NADPH oxidado. Foi observada maior produção de ROS mitocondrial para animais submetidos ao estresse térmico, 0,34 vs 0,22, para reações contendo apenas rotenona, e 0,31 vs 0,23, nas reações com a presença de rotenona mais antimicina. Codornas que permaneceram em ambiente de estresse térmico apresentaram também significativamente maior atividade da enzima glutationa peroxidase nos hepatócitos (47,8 vs 39,6). Assim, verificou-se que estresse térmico agudo, de 34oC por 24 horas, foi capaz de atuar na produção de ROS mitocondrial e na atividade da enzima glutationa peroxidase no fígado de codornas.
Abstract: The growth rate of birds occurs due to the feed efficiency and deposition of muscle mass, as well as environmental conditions. Thus, this study aimed to evaluate the weight gain and feed conversion and the expression of mitochondrial genes involved in the energy synthesis, mRNA UCP (uncoupling protein), mRNA ANT (adenine nucleotide translocator) and mRNA COXIII (cytochrome c oxidase subunit III), and the expression of genes involved in animal growth, GHR mRNA (growth hormone receptor) and IGF-I (insulin-like growth factor I) in the liver and in the breast muscle of broilers fed with diets containing two sources and two levels of methionine supplementation, and to evaluate the influence of acute thermal stress on the production of mitochondrial ROS and glutathione peroxidase activity in the liver of quails. In this work broilers from 22 to 42 days of age were distributed into five treatments (basal diet, supplementations of first level of DL-methionine, of second level of DL-methionine, of first level of MHA-FA and second level of MHA-FA). At the end of the experimental period the birds were killed by cervical dislocation, the breast muscle and the liver were collected for total RNA extraction. The cDNA was amplified using specific primers designed for the genes analyzed by qRT-PCR. The birds fed with second level of methionine supplementation were more efficient in the feed conversion, regardless the commercial source used. The best weight gain was observed in the second level of DLmethionine supplementation. Significant lower amount of mRNA UCP was observed in the breast muscle of animals fed with diets containing added methionine, being the highest expression of this gene observed in broilers fed with the basal diet, treatment which was also responsible for the worst feed efficiency. The mRNA UCP expression in the liver, and the mRNA COX III and mRNA ANT expression in the liver and in the muscle was not influenced by methionine supplementation. The GHR and IGF-I gene expression in the breast muscle was not affected by methionine supplementation. However, a significant difference between the basal diet and the second level of DLmethionine on GHR mRNA expression in the liver was observed, whereas animals which received this level of supplementation showed higher expression of the gene. The expression of IGF-I in the liver was higher in the animals fed with diets supplemented with methionine compared to those fed with basal diet. The second level of DLmethionine supplementation also had the highest expression in relation to those animals which received the first level of DL-methionine supplementation (1.56 AU vs 0.97 AU).The methionine supplementation improved weight gain and feed efficiency, as expected, in part, by influencing the expression of genes involved in these characteristics. The birds? performance is also affected by environmental conditions. Thus, an experiment was conducted with the purpose of evaluating the production of mitochondrial ROS and glutathione peroxidase activity. Quails with 30 days of age were divided into two groups, the animals pertaining to thermoneutral treatment were slaughtered immediately and the second group was subjected to thermal stress of 34oC for 24 hours. To analyze the production of ROS, the livers were collected for the isolation of mitochondria and subsequent analysis of mitochondrial ROS. Glutathione peroxidase activity was determined using hydrogen peroxide (H2O2), and based on the amount of NADPH oxidized. A higher production of mitochondrial ROS was observed in animals subjected to thermal stress, 0.34 vs 0.22, for reactions containing only rotenone, and 0.31 vs 0.23, in reactions containing rotenone and antimycin. Quails that remained in the environment of heat stress also had significantly higher glutathione peroxidase activity in the hepatocytes (47.8 vs. 39.6). Therefore, it was observed that acute thermal stress of 34oC for a period of 24 hours was able to act in the mitochondrial ROS production and in the glutathione peroxidase activity in the liver of quails. |