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Consultar: Programa de Ps-Graduao em Cincia de Alimentos

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Ttulo [PT]: Determinao de resduos de oxitetraciclina, tetraciclina, ortetraciclina e doxiciclina em leite bovino porcromatografia lquida de alta eficincia
Autor(es): Carolina Kato Prado
Palavras-chave [PT]:

Leite bovino. Resduos de medicamentos veterinrios. Tetraciclinas. CLAE. Segurana alimentar. Validao. Brasil.
Palavras-chave [EN]:
Bovine milk. Veterinary drug residues. Tetracyclines. HPLC. Food safety. Validation. Brazil.
Titulao: Mestre em Cincia de Alimentos
Banca:
Miguel Machnski Jnior [Orientador]
Felix Guilhermo Reyes Reyes
Jesui Verglio Visentainer
Resumo:
Resumo: INTRODUO. As tetraciclinas so uma classe de antibiticos de largo espectro, muito utilizadas na preveno e tratamento de infeces no gado leiteiro. Porm seu uso indiscriminado e o no respeito ao perodo de carncia podem gerar resduos no leite, que podem causar resistncia a bactrias, alergias e perdas econmicas aos produtores de leite e seus derivados. Dessa forma, fiscalizao e monitoramento da presena desses antimicrobianos em leite so necessrios a fim de garantir a segurana dos consumidores e evitar prejuzos financeiros. Para isso, vrias metodologias tm sido utilizadas, sendo a cromatografia lquida de alta eficincia a preferida por apresentar rapidez na anlise, seletividade, exatido e reprodutibilidade. Aliado a isso, legislaes de diversos pases j estabelecem limites seguros desses resduos em alimentos (LMR). OBJETIVOS. (I) Fornecer informaes a respeito dos mtodos empregados na determinao de tetraciclinas em leite relatadas na literatura cientfica. (II) Validar um mtodo multirresduo para determinao de tetraciclinas (oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina e doxiciclina) em leite bovino por cromatografia lquida de alta eficincia com deteco UV-VIS de acordo com os critrios analticos definidos pela Comisso Europia 2002/657/EC. (III) Investigar a ocorrncia de resduos de tetraciclinas em leite bovino pasteurizado por cromatografia lquida de alta eficincia com sistema de deteco UV/VIS. (IV) Avaliar a exposio da populao aos resduos desses antimicrobianos no leite comercializado no Estado do Paran. MATERIAL E METODOS. Foi realizada uma reviso das metodologias analticas para determinao de tetraciclinas relatadas na literatura cientfica. A validao consistiu de um mtodo de extrao, em que as amostras de leite foram desproteinizadas com soluo tampo McIlvaine e cido tricloroactico 20% e a limpeza ocorreu em colunas C18. As tetraciclinas foram determinadas em um cromatgrafo lquido de alta eficincia com deteco UV/VIS a 365 nm. A fase mvel em gradiente consistiu de cido oxlico 0,01 mol/L, acetonitrila e trietilamina. Foi utilizada coluna C8. Para investigao da ocorrncia de tetraciclinas, 100 amostras foram coletadas no Estado do Paran, no perodo entre Maro/2010 e Outubro/2011, e analisadas pelo mtodo validado. Para avaliar a exposio aos resduos de tetraciclinas foi calculada a Ingesto Diria Estimada (IDE) segundo o JECFA. A IDE foi comparada com a Ingesto Diria Aceitvel de grupo (IDA) de 0-0,03 mg/kg peso corpreo (p.c.), estabelecidas para somatria da presena das tetraciclinas (oxitetraciclina, tetraciclina, clortetraciclina e doxiciclina). RESULTADOS E DISCUSSO. As etapas para determinao de resduos de antibiticos no leite so: extrao, limpeza, identificao/quantificao e confirmao da identidade dos analitos, sendo a primeira, o principal problema dessa anlise devido a matriz conter altos teores de protenas e lipdios que podem interferir na determinao desses resduos. Dessa forma, tem-se pesquisado mtodos de extrao e limpeza que consistem em desproteinizao e retirada desses componentes, mas que sejam simples e rpidos. Assim, muitos pesquisadores optam por solues e tampes cidos, e colunas de fase slida. Para identificao e quantificao, as tcnicas mais utilizadas so cromatografia lquida de alta eficincia e eletroforese capilar, que apresentam resultados semelhantes e a confirmao geralmente feita por espectrometria de massas. O mtodo validado nesse trabalho apresentou limites de deteco e quantificao de 42,3 a 75,8 e 43,2 a 76,4 g/kg, respectivamente. O limite de deciso (CCα) e capacidade de deteco 15 (CC) variaram de 114,2 a 143,7 e 129,3 a 188,7, respectivamente. Recuperaes de tetraciclinas em amostras fortificadas ficaram acima de 82,5%. Das 100 amostras analisadas, trs estavam contaminadas com valores de 121,8 g/kg para oxitetraciclina, 93,5 g/kg para tetraciclina e 134,6 g/kg para clortetraciclina (61,6 g/kg) e doxiciclina (73,0 g/kg). A concentrao mediana de resduos de tetraciclinas encontrada nas amostras foi de 42,3 g/kg e a IDE foi de 0,05 g/kg p.c./dia para o Brasil, 0,08 g/kg p.c./dia para a regio Sul do pas e 0,07 g/kg p.c./dia para o Estado do Paran. CONCLUSES. Dentre as tcnicas analticas para determinao de resduos de tetraciclinas em leite, a mais utilizada a cromatografia em fase lquida de alta eficincia (CLAE) com sistema de deteco por absoro no ultravioleta (UV) ou por arranjo de diodos. O mtodo validado neste trabalho para determinao de tetraciclinas em leite bovino pasteurizado, segundo a regulamentao 2002/657/EC da Unio Europia, apresentou-se linear, especfico, seletivo, preciso e exato. Portanto, este mtodo apresentou eficincia suficiente para o monitoramento de tetraciclinas em leite de acordo com os requisitos da Unio Europia. E os resultados das anlises das amostras coletadas demonstraram que a ocorrncia de tetraciclinas em leite no Brasil foi baixa (3%), porm foram encontradas amostras acima do LMR (2%), e o risco da populao a estes resduos no leite considerado negligencivel (<1%IDA).

Abstract: INTRODUCTION. Tetracyclines are a large spectrum class of antibiotic, widely used in prevention and treatment of infection in dairy cattle. Though its indiscriminate use and the disrespect to the withdraw period may result residues in milk, which can cause bacteria resistance, allergies, and economic losses to producers of milk and dairy products. Therefore, surveillance and monitoring of the presence of antibiotics in milk are needed to ensure consumer safety and avoid financial losses. For that, several methods have been used, and the high performance liquid chromatography is preferred by presenting analysis speed, selectivity, accuracy and reproducibility. Moreover, laws of several countries have established safe limits of residues in food (LMR). OBJECTIVES. (I) Provide information about the methods used in the determination of tetracyclines in milk reported in the literature. (II) Validate a multiresidue method for the determination of tetracyclines (oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline) in bovine milk by high performance liquid chromatography with UV-VIS detector according to analytical criteria defined by European Commission 2002/657/EC. (III) Investigate the occurrence of tetracyclines residue in bovine pasteurized milk by high performance liquid chromatography detection system with UV/VIS. (IV) Assessment the population exposure to antimicrobial residues in milk commercialized in the State of Parana, Brazil. MATERIAL AND METHODS. A review of analythical methods for determination of tetracyclines reported in the literature was performed. Validation of an extraction method, wherein the milk samples were deproteinated with Mcllvaine buffer and 20% trichloroacetic acid and cleanup carried out in C18 columns. Tetracyclines have been separated into a high efficiency liquid chromatograph with UV/VIS detector set at 365 nm by a gradient composed of oxalic acid 0.01 mol/L, acetonitrile and triethylamine in C8 column. To investigate the occurrence of tetracyclines, 100 samples were collected in the State of Parana, between March/2010 and October/2011, and analyzed by the validated method. To evaluate the exposure to the tetracyclines residue, it was calculated the Estimated Daily Intake (EDI) according to the JECFA. The EDI was compared to the Acceptable Daily Intake (ADI) from 0 to 0.03 mg/kg body weight (bw). RESULTS AND DISCUSSION. The steps for determining antibiotic residues in milk are: extraction, cleanup, identification/quantification and confirmation. The main problem with this analysis due the matrix effect that may interfere with the determination of these residues. Therefore, we have investigated methods of extraction and cleanup witch consist of deproteinization and removal of these components, but that are simple and quick. Thus, many researchers have used to solutions and acidic buffers,and solid phase columns. For identification and quantification, the most used techniques are high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis, which show precise results and the confirmation is generally made by mass spectrometry. The validated method in this work presented the limits of detection and quantification from 42.3 to 75.8 and 43.2 to 76.4 g/kg, respectively. The decision limit (CCα) and detection capability (CC) varied from 114.2 to 143.7 and 129.3 to 188.7 g/kg, respectively. Recoveries of tetracyclines in fortified samples were above 82.5%. Of 100 samples analyzed, three were contaminated with values of 121.8 g/kg for oxytetracycline, 93.5 g/kg for tetracycline and 134.6 g/kg for chlortetracycline (61.6 13 g/kg) and doxycycline (73.0 g/kg). The median of residues of tetracyclines found in the samples was 42.3 g/kg and EDI was 0.05 g/kg bw/day for Brazil, 0.08 g/kg bw/day for the Southern region and 0.07 g/kg bw/day for the State of Parana. CONCLUSIONS. Among the analytical techniques for the determination of tetracyclines residue in milk, the most commonly used is the high performance liquid chromatography (HPLC) with ultraviolet detection system (UV) or diode array. Although there are techniques which have good results, but with lower sensitivity such as capillary electrophoresis, but allows a rapid and less polluting analysis. The method validated in this study for determination of tetracyclines in pasteurized bovine milk, according to regulation 2002/657/EC of the European Union, presented linearity, specificity, selectivity, precision and accuracy. Therefore, this method showed efficiency enough for the monitoring of tetracyclines in milk. Results of analysis of the collected samples showed that the occurrence of tetracylines in milk was low (3%), but had samples above the MRL (2%), and the risk to the population to these residues in the milk was regarded as egligible (<1% ADI).
Data da defesa: 03/04/2012
Cdigo: vtls000199143
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2012
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Miguel Machnski Jnior
Instituio: Universidade Estadual de Maring. Centro de Cincias Agrrias. Programa de Ps-Graduao em Cincia de Alimentos
Nvel: Dissertao (mestrado em Cincia de Alimentos)/
UEM: Departamento de Agronomia

Responsavel: inez
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Dissertacao Prado, C.K.pdf
Tamanho: 480 Kb (491889 bytes)
Criado: 24-07-2013 13:40
Atualizado: 24-07-2013 14:37
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