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Título [PT]: Estudo da diversidade genética em Cattleya forbesii Lindi. (Orchidaceae), propagadas in vitro, utilizando isoenzimas
Título [EN]: Genetic diversity in Cattleya forbesii Lindl. (orchidaceae), disseminated in vitro, by isozymes.
Autor(es): Leticia Oliveira Claudino
Palavras-chave [PT]:

Cattleya forbesii. Isoenzimas. Diversidade genética. Germinação in vitro. Brasil.

Cattleya forbesii, isoenzymes, genetic diversity, in vitro germination. Brazil.

Claudete Aparecida Mangolin [Orientador] - UEM Clandio Medeiros da Silva - IAP Maria Auxiliadora Milaneze Gutierre - UEM

Resumo: A proposta no presente estudo foi estabelecer a metodologia para estudo de Esterase (EST; EC 3.1.1.1), utilizando o sistema PAGE (Polyacrylamide Gel Electrophoresis), Malato Desidrogenase (MDH; EC 1.1.1.37) e Isocitrato Desidrogenase (IDH; EC 1.1.1.42), com o objetivo de investigar a diversidade genética em plântulas de Cattleya forbesii formadas a partir de sementes germinadas in vitro, sobre meio nutritivo Knudson (1946). Diferentes condições de extração e de fracionamento para os três sistemas isoenzimáticos foram testadas. Para a extração, a condição mais adequada foi a maceração das amostras de plântulas inteiras e com a solução de extração preparada com 5 % de PVP-40. A condição mais adequada para o estudo de α-e β-esterases em C. forbesii foi com o fracionamento realizado em géis de poliacrilamida 12 % por 6 horas e 30 minutos. Para as isoenzimas MDH e IDH, o melhor fracionamento foi em gel de amido 16 %, preparado com tampão contendo ácido cítrico 0,04 M, titulado com morfolina [N-(3-AMINOPROPYL)-MORFOLINE], para pH 7,5 com voltagem de 60 V, nas extremidades dos géis, por 14 horas. Para as condições padronizadas, foram revelados 10 loci (sete para EST, dois para MDH e um para IDH), conferindo um polimorfismo de 80 % para a população de C. forbesii estudada. O número médio de alelos por locus e por locus polimórfico para C. forbesii foi de 3,1250 e de 2,5788 respectivamente. Os alelos de sete dos oito loci analisados não se apresentaram em equilíbrio de Hardy-Weinberg e somente o locus Mdh-1 manteve-se em equilíbrio. O valor médio de Fis para os oito loci analisados foi de 0,2870, indicando que existe uma deficiência de heterozigotos para a população analisada. Um excesso de heterozigotos foi observado para os loci s-MDH e mt-MDH, sugerindo um significado fisiológico para esta condição. A base genética das plântulas obtidas de sementes germinadas in vitro, usando o meio KC foi ampla (80 % de polimorfismo) indicando que o cultivo in vitro produz mudas de orquídeas com uma ampla variabilidade genética. O sistema de germinação e cultivo in vitro das sementes de C. forbesii não estabeleceu uma pressão de seleção capaz de indicar uma redução na diversidade genética da espécie, podendo ser considerado adequado para produzir mudas para reposição de estoques a serem cultivados na natureza, ou com a perspectiva de realizar cruzamentos preferenciais para estimular a produção de híbridos em programas de melhoramento. Abstract:Current analysis establishes a methodology for the study of Esterase (EST; EC 3.1.1.1), Malato Dehydrogenase (MDH; EC 1.1.1.37) and Isocitrate Dehydrogenase (IDH; EC 1.1.1.42) by PAGE (Polyacrylamide Gel Electrophoresis) system to investigate the genetic diversity in C. forbesii shoots formed from in vitro germinated seeds. Different extraction and fractioning conditions were tested for the three isoenzyme systems. In the case of extraction, the most adequate condition occurred when plant samples were macerated whole and extraction solution prepared with 5 % PVP-40. The most adequate condition for studying α- and β-esterases in C. forbesii occurred by fractioning in polyacrylamide gel 12 % during 6 h and 30 minut. The best fractioning in the case of isoenzymes MDH and IDH, occurred in starch gel 16 % prepared with a buffer with citric acid 0.04M titred with morpholine [N-(3-AMINOPROPYL)-MORPHOLINE] for pH 7.5 at a 60 V voltage at the gel extremities during 14 h. Ten loci (seven for EST, two for MDH and one for IDH) were identified within the context of standardized conditions. This provided an 80 % polymorphism for the C. forbesii population under analysis. Mean number of alleles per locus and per polymorphic locus for C. forbesii were respectively 3.1250 and 2.5788. Alleles of seven of the eight loci analyzed were not distributed according to Hardy-Weinberg equilibrium. Only locus Mdh-1 maintained the equilibrium. Mean Fis value for the eight loci analyzed was 0.2870 and indicated heterozygote deficit in the population. Since excess of heterozygotes has been reported for loci s-Mdh and mt-MDH , this fact suggested a physiological significance for such a condition. The genetic basis of the plants grown from seeds germinated in vitro with KC medium was broad (80 % polymorphism) and indicated that in vitro culture may produce orchids with an extensive genetic variety. Germination system and in vitro culture of C. forbesii seeds failed to establish selection pressure that may indicate a decrease in the species's genetic diversity. The system may be adequate to produce shoots for stock reposition to be cultivated in nature or for preferential crossings to stimulate the production of hybrids in improvement programs.

Idioma: Português Data de Publicação: 2011 Local de Publicação: Maringá, PR Orientador: Prof.ª Dr.ª Claudete Aparecida Mangolin Instituição: Universidade Estadual de Maringá. Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento Nível: Dissertação (mestrado em Genética e Melhoramento)/ UEM:

Responsavel: beth
Categoria: Aplicação
Formato: Documento PDF
Arquivo: leticia0510.pdf
Tamanho: 1407 Kb (1441134 bytes)
Criado: 09-04-2014 10:12
Atualizado: 09-04-2014 10:23
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