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Consultar: Programa de Ps-Graduao em Zootecnia

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Ttulo [PT]: Influncia da baixa temperatura e diferentes crioprotetores em ocitos e embries de Colossoma macropomum e Piaractus brachypomus
Autor(es): Melanie Digmayer
Palavras-chave [PT]:

Peixes. Crioconservao. Injrias embrionrias. Pirapitinga. Tambaqui. Brasil.
Palavras-chave [EN]:
Fish. Cryopreservation. Embryonic injuries. Pirapitinga. Amazonian fish. Brazil.
rea de concentrao: Produo Animal
Titulao: Doutor em Zootecnia
Banca:
Ricardo Pereira Ribeiro [Orientador] - UEM
Luiz Paulo Rigolon - UEM
Lauro Daniel Vargas Mendez - UEM
Nelson Maurcio Lopera Barrero - UEL
Luiz Alexandre Filho - UEM
Resumo:
Resumo: O objetivo neste trabalho foi desenvolver metodologias de criopreservao de ocitos de Colossoma macropomum, e ocitos e embries de Piaractus brachypomus, analisar as injrias causadas nos ocitos e embries aps a exposio s solues crioprotetoras e criopreservao. Os ocitos de C. macropomum foram distribudos em seis solues crioprotetoras: T1- metanol 1,6M + sacarose 0,25M; T2- metanol 1,6M + sacarose 0,5M; T3- metanol 1,6M + trealose 0,25M; T4- metanol 1,6M + trealose 0,5M; T5- metanol 1,6M + frutose 0,25M; T6- metanol 1,6M + frutose 0,5M e T7- controle de ecloso. Os ocitos foram mantidos nas solues crioprotetoras por 20 minutos, em temperatura ambiente, fertilizados e levados s incubadoras. A segunda parcela dos ocitos foi submetida congelao lenta, armazenada em nitrognio lquido, descongelada, sendo parte fixada e outra parte fertilizada e mantidas em incubadoras. A probabilidade de ocorrer sobrevivncia dos ocitos submetidos ao T1, em temperatura ambiente foi maior (15,8%). Quanto sobrevivncia depois de eclodidas as larvas, no houve diferena entre os tratamentos. Na fertilizao dos ocitos que passaram pela congelao lenta no foi obtida ecloso das larvas. Foi verificada preservao morfolgica nos T1 e T2 cuja soluo crioprotetora continha metanol 1,6M e sacarose 0,25 e 0,50M, respectivamente. Os ocitos de Piaractus brachypomus foram distribudos em oito solues crioprotetoras: T1- metanol 1,6M + sacarose 0,25M + 50% L15; T2- metanol 3,1M + sacarose 0,25M + 50% L15; T3- DMSO 0,7M + sacarose 0,25M + 50% L15; T4- DMSO 1,3M + sacarose 0,25M + 50% L15; T5- metanol 1,6M + sacarose 0,25M + Hank; T6- metanol 3,1M + sacarose 0,25M + Hank;T7- DMSO 0,7M + sacarose 0,25M + Hank; T8- DMSO 1,3M + sacarose 0,25M + Hank. Os embries congelados a -13C foram distribudos em oito solues crioprotetoras: T1- metanol 3,1M + PVP 0,15M + Hank; T2- metanol 3,1M + PVP 0,3M + Hank; T3- metanol 3,1M + PVP 0,45M + Hank; T4- metanol 3,1M + PVP 0,6M + Hank; T5- metanol 3,1M + sacarose 0,45M + Hank; T6- metanol 3,1M + sacarose 0,63M + Hank; T7- metanol 3,1M + sacarose 0,81M + Hank; T8- metanol 3,1M + sacarose 1,0M + Hank. Os embries congelados em nitrognio lquido foram distribudos em quatro solues crioprotetoras: T1- metanol 3,1M + sacarose 0,45M + Hank; T2- metanol 3,1M + sacarose 0,63M + Hank; T3- metanol 3,1M + sacarose 0,81M + Hank; T4- metanol 3,1M + sacarose 1,0M + Hank. Para anlise morfolgica foram processados ocitos e embries em historesina e ocitos para tcnica de microscopia eletrnica de varredura. Dos ocitos de P. brachypomus mantidos em temperatura ambiente e fertilizados, os tratamentos que apresentaram desenvolvimento embrionrio foram o T5 (metanol 1,5M, sacarose 0,25 M e soluo de Hank), 17,3% e T7 (DMSO 0,7M, sacarose 0,25 M e soluo de Hank), 1,8%. Na fertilizao dos ocitos submetidos curva de congelao lenta no houve desenvolvimento embrionrio aps a fertilizao. Na avaliao morfolgica, verificou-se que os ocitos de P. brachypomus submetidos a congelao lenta quando na soluo crioprotetora com 1,6M metanol+ 0,25M sacarose + soluo de Hank (T5) apresentaram a zona radiata ntegra e com contorno regular. Dos embries que foram submetidos congelao a - 13C, no T5, 15,3% dos embries se desenvolveram e foi significativamente maior que no T6 (4,6%), T3 (1,5%), T7 (1,8%) e T8 (1,9%) e tambm houve desenvolvimento embrionrio. Nos demais tratamentos , todos os embries submetidos s solues crioprotetoras em temperatura de -13C e os embries submetidos aos tratamentos em nitrognio lquido resultaram em embries mortos. Nenhum tratamento com ocitos de C. macropomum e ocitos e embries de P. brachypomus proporcionou manuteno da capacidade fecundante aps a congelao.

Abstract: The aim of this work was to develop methods for cryopreservation of Colossoma macropomum oocytes and oocytes and embryos of Piaractus brachypomus, as well as to analyze the damages in oocytes and embryos after exposure to cryoprotectant solutions and cryopreservation. Oocytes of C. macropomum were distributed in six cryoprotectant solutions: T1 -methanol 1.6 M + sucrose 0.25 M, T2 - methanol 1.6 M + sucrose 0.5 M, T3 - methanol 1.6 M + trehalose 0.25 M, T4 - methanol 1.6 M + trehalose 0.5 M, T5 - methanol 1.6 M + fructose 0.25 M, T6 - methanol 1.6 M + fructose 0.5 M and T7 - outbreak control. Oocytes were kept in cryoprotectant solutions for 20 minutes at room temperature, fertilized and taken to incubators. A second portion of the oocytes were underwent to slow freezing, stored in liquid nitrogen, thawed, and a part was fixed while the other was fertilized and kept in incubators. The survival probability of oocytes subjected to T1 at room temperature was higher (15.8%). As for survival after hatched larvae, there was no difference between treatments. In the fertilization of oocytes that passed by slow freezing there was not hatching. Morphological preservation was observed in T1 and T2 with cryoprotectant solution containing methanol 1.6 M and sucrose 0.25 and 0.50 M, respectively. The oocytes of Piaractus brachypomus were distributed in eight cryoprotectant solutions: T1 - methanol 1.6 M + sucrose 0.25 M + 50 % L15, T2 -methanol 3.1 M + sucrose 0.25 M + 50 % L15, T3 - DMSO 0.7M + sucrose 0.25 M + 50% L15, T4 - DMSO 1.3 M + sucrose 0.25 M + 50% L15, T5 -methanol 1.6 M + sucrose 0.25 M + Hank, T6 - methanol 3.1 M + sucrose 0,25M + Hank, T7 -DMSO 0.7 M + sucrose 0.25 M + Hank, T8 - DMSO 1.3 M + sucrose 0.25 M + Hank. The embryos frozen at -13C were distributed in eight cryoprotectant solutions: T1 - methanol 3.1M + 0.15M PVP + Hank, xvi T2 - methanol 3.1 M + PVP 0.3 M + Hank, T3 - methanol 3.1 M + PVP 0,45M + Hank, T4 - methanol 3.1 M + PVP 0.6 M + Hank, T5 -methanol 3.1 M + sucrose 0.45 M + Hank, T6 - methanol 3.1 M + sucrose 0.63 M + Hank, T7 - methanol 3.1 M + sucrose 0.81 M + Hank, T8 - methanol 3.1 M + sucrose 1.0 M + Hank. Embryos frozen in liquid nitrogen were distributed in four cryoprotectant solutions: T1 - methanol 3.1 M + sucrose 0.45 M + Hank, T2 - methanol 3.1 M + sucrose 0.63 M + Hank, T3 - methanol 3.1 M + sucrose 0.81M + Hank, T4 - methanol 3.1 M + sucrose 1.0 M + Hank. For morphological analysis oocytes and embryos were processed in historesin and oocytes for scanning electron microscopy technique. For oocytes of P. brachypomus kept at room temperature and fertilized treatments that showed embryo development were T5 (methanol 1.5 M, sucrose 0.25 M solution and Hank), 17.3% and T7 (DMSO 0.7 M, sucrose 0.25 M and Hank) 1.8%. In fertilization of oocytes subjected to slow freezing curve there was not embryo development after fertilization. In the morphological analysis it was found that the oocytes of P. brachypomus when subjected to slow freezing in extender solution with methanol 1.6 M + sucrose 0.25 M + solution hank (T5) showed a full zona radiata with regular contour. From embryos that were underwent freezing at -13C in T5, 15.3% developed and was significantly higher than in T6 (4.6%), T3 (1.5%), T7 (1.8%) and T8 (1.9%) and there was also embryo development. In other treatments, all embryos subjected to cryoprotectant solutions at a temperature of -13C and embryos subjected to treatments in liquid nitrogen resulted in dead embryos. No treatment with oocysts of C. macropomum and oocytes and embryos of P. brachypomus provided maintenance of fertilizing capacity after freezing.
Data da defesa: 1/10/2013
Cdigo: vtls000213774
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2013
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Ricardo Pereira Ribeiro
Co-Orientador: Prof. Dr. Danilo Pedro Streit Junior
Instituio: Universidade Estadual de Maring. Centro de Cincias Agrrias. Programa de Ps-Graduao em Zootecnia
Nvel: Tese (doutorado em Zootecnia)/
UEM: Departamento de Zootecnia

Responsavel: zenaide
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Tese Melanie Digmayer-VersoDefinitiva-26112013.pdf
Tamanho: 1077 Kb (1103000 bytes)
Criado: 14-11-2014 15:14
Atualizado: 14-11-2014 15:25
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