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Ttulo [PT]: Deteco de contaminao e a investigao da transmisso vertical do BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus) em raas do banco de germoplasma de bicho-da-seda da Universidade Estadual de Maring
Autor(es): Cludia Regina das Neves Saez
Palavras-chave [PT]:

Bicho-da-seda. Transmisso vertical. Bombyx mori nucleopolyhedroviruses. Contaminao. Banco de germoplasma. Vrus. Brasil.
Palavras-chave [EN]:
Mombyx mori. Vertical transmission. Bombyx mori nucleopolyhedroviruses. Contamination. Genebank. Virus. Brazil.
rea de concentrao: Gentica e Melhoramento
Titulao: Mestre em Gentica e Melhoramento
Banca:
Maria Aparecida Fernandez [Orientador] - UEM
Lucinia de Ftima Chasko Ribeiro - UNIOESTE
Adriana Gonela - UEM
Resumo:
Resumo: Neste trabalho reportamos a deteco molecular do BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus), em raas experimentais de Bombyx mori pertencentes ao banco de germoplasma da Universidade Estadual de Maring. Para tanto, foi realizada a extrao do DNA de 6 mariposas fmeas de cada raa de B. mori (B82, M11-2, M18, C36, F6, M18-2, M12-2, J1, C25, C75, C24, KR01, M11-A, AS3, B106, M8, M11, C211, E8 e Hindu), sendo formados pools gnicos individuais. Para obteno dos fragmentos amplificados, foi desenhado um par de primers baseado em seqncia especficas do genoma do baculovrus correspondentes regio da ORF 14 do BmNPV e, para controle, um par de primers referente a um segmento do gene da Actina A3 de B. mori. Dos vinte pools gnicos analisados, quinze apresentaram a banda de 443 pares de base, pb, que indica a presena do vrus. Somente as populaes B82, M11-2, M18, C36 e F6 no apresentaram contaminao. A freqncia de mariposas infectadas dentre os quinze pools gnicos detectados como contaminados foi investigada mediante amplificaes individuais. A frequncia de mariposas contaminadas foi: 100% de contaminao para as raas M18-2, M12-2 e J1; 83% para C25, C75, e C24; 66% para KR01; 50% para M11-A; 33% para AS3, B106, M8 e M11 e 16% para as raas C211, E8 e Hindu. Todas as amostras de DNA amplificadas das mariposas por meio da PCR multiplex apresentaram a banda de 721pb que comprova que o DNA amplificado era de B. mori e que no ocorreu nenhuma interferncia na reao. A deteco de produtos de PCR de tamanho esperado (443pb) em ovos de indivduos que estavam contaminados no foi conclusiva. Uma das hipteses da dificuldade de deteco da contaminao por BmNPV em ovos pode estar relacionada reduzida concentrao do vrus na amostra. Esses resultados so promissores para a identificao de x contaminao por BmNPV, evitando a proliferao deste em geraes subseqentes.

Abstract: In the present work we reported the molecular detection of BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus) with experimental silkworm breeds of the Universidade Estadual de Maring germplasm bank. DNA extraction followed routine methodology. DNA of six Bombyx mori females moths of each breed (B82, M11-2, M18, C36, F6, M18-2, M12-2, J1, C25, C75, C24, KR01, M11-A, AS3, B106, M8, M11, C211, E8 and Hindu), composed individual pools gene. PCR (Polymerase Chain Reaction (PCR) used a pair of primers that was designed based on specific sequence of the baculovirus genome corresponding to BmNPV ORF 14. Another pair of primers was used to amplify the silkworm Actin A3 gene segment, which was used as positive control. Twenty gene pools were analyzed, and fifteen showed a band of 443 base pairs, bp, that indicates the presence of BmNPV genome. Populations B82, M11-2, M18, C36 and F6 showed no contamination. The frequency of infected moths of the fifteen gene pools detected as contaminated was investigated by individual PCR amplifications. The frequency of contaminated moths were: 100% for silkworm breeds M18-2, M12-2 and J1, 83% for C25, C75 and C24 breeds, 66% for KR01, 50% for M11-A, 33% for AS3, B106, M8 and M11 and 16% for C211, Hindu and E8 breeds. All DNA amplified by multiplex PCR showed a band of 721 bp, which confirms that the amplified DNA was from B. mori specimens. The detection of PCR fragments of the expected size (443 pb) in infected individuals eggs was not conclusive. The difficulty in detecting BmNPV contamination in eggs may be due the low concentration of virus in samples. These are promising results for the identification of contamination by BmNPV, thus preventing virus proliferation in subsequent generations.
Data da defesa: 02/03/2012
Cdigo: vtls000213838
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2012
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Maria Aparecida Fernandez
Instituio: Universidade Estadual de Maring. Centro de Cincias Agrrias. Programa de Ps-Graduao em Gentica e Melhoramento
Nvel: Dissertao (mestrado em Gentica e Melhoramento)/
UEM: Departamento de Agronomia

Responsavel: zenaide
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: m-crnsaez.pdf
Tamanho: 1475 Kb (1510843 bytes)
Criado: 30-08-2014 09:18
Atualizado: 30-08-2014 09:27
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