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Título [PT]: Detecção de contaminação e a investigação da transmissão vertical do BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus) em raças do banco de germoplasma de bicho-da-seda da Universidade Estadual de Maringá
Autor(es): Cláudia Regina das Neves Saez
Palavras-chave [PT]:

Bicho-da-seda. Transmissão vertical. Bombyx mori nucleopolyhedroviruses. Contaminação. Banco de germoplasma. Vírus. Brasil.

Mombyx mori. Vertical transmission. Bombyx mori nucleopolyhedroviruses. Contamination. Genebank. Virus. Brazil.

Maria Aparecida Fernandez [Orientador] - UEM Lucinéia de Fátima Chasko Ribeiro - UNIOESTE Adriana Gonela - UEM

Resumo: Neste trabalho reportamos a detecção molecular do BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus), em raças experimentais de Bombyx mori pertencentes ao banco de germoplasma da Universidade Estadual de Maringá. Para tanto, foi realizada a extração do DNA de 6 mariposas fêmeas de cada raça de B. mori (B82, M11-2, M18, C36, F6, M18-2, M12-2, J1, C25, C75, C24, KR01, M11-A, AS3, B106, M8, M11, C211, E8 e Hindu), sendo formados pools gênicos individuais. Para obtenção dos fragmentos amplificados, foi desenhado um par de primers baseado em seqüência específicas do genoma do baculovírus correspondentes à região da ORF 14 do BmNPV e, para controle, um par de primers referente a um segmento do gene da Actina A3 de B. mori. Dos vinte pools gênicos analisados, quinze apresentaram a banda de 443 pares de base, pb, que indica a presença do vírus. Somente as populações B82, M11-2, M18, C36 e F6 não apresentaram contaminação. A freqüência de mariposas infectadas dentre os quinze pools gênicos detectados como contaminados foi investigada mediante amplificações individuais. A frequência de mariposas contaminadas foi: 100% de contaminação para as raças M18-2, M12-2 e J1; 83% para C25, C75, e C24; 66% para KR01; 50% para M11-A; 33% para AS3, B106, M8 e M11 e 16% para as raças C211, E8 e Hindu. Todas as amostras de DNA amplificadas das mariposas por meio da PCR multiplex apresentaram a banda de 721pb que comprova que o DNA amplificado era de B. mori e que não ocorreu nenhuma interferência na reação. A detecção de produtos de PCR de tamanho esperado (443pb) em ovos de indivíduos que estavam contaminados não foi conclusiva. Uma das hipóteses da dificuldade de detecção da contaminação por BmNPV em ovos pode estar relacionada à reduzida concentração do vírus na amostra. Esses resultados são promissores para a identificação de x contaminação por BmNPV, evitando a proliferação deste em gerações subseqüentes. Abstract: In the present work we reported the molecular detection of BmNPV (Bombyx mori nucleopolyhedrovirus) with experimental silkworm breeds of the Universidade Estadual de Maringá germplasm bank. DNA extraction followed routine methodology. DNA of six Bombyx mori females moths of each breed (B82, M11-2, M18, C36, F6, M18-2, M12-2, J1, C25, C75, C24, KR01, M11-A, AS3, B106, M8, M11, C211, E8 and Hindu), composed individual pools gene. PCR (Polymerase Chain Reaction (PCR) used a pair of primers that was designed based on specific sequence of the baculovirus genome corresponding to BmNPV ORF 14. Another pair of primers was used to amplify the silkworm Actin A3 gene segment, which was used as positive control. Twenty gene pools were analyzed, and fifteen showed a band of 443 base pairs, bp, that indicates the presence of BmNPV genome. Populations B82, M11-2, M18, C36 and F6 showed no contamination. The frequency of infected moths of the fifteen gene pools detected as contaminated was investigated by individual PCR amplifications. The frequency of contaminated moths were: 100% for silkworm breeds M18-2, M12-2 and J1, 83% for C25, C75 and C24 breeds, 66% for KR01, 50% for M11-A, 33% for AS3, B106, M8 and M11 and 16% for C211, Hindu and E8 breeds. All DNA amplified by multiplex PCR showed a band of 721 bp, which confirms that the amplified DNA was from B. mori specimens. The detection of PCR fragments of the expected size (443 pb) in infected individuals eggs was not conclusive. The difficulty in detecting BmNPV contamination in eggs may be due the low concentration of virus in samples. These are promising results for the identification of contamination by BmNPV, thus preventing virus proliferation in subsequent generations.

Idioma: Português Data de Publicação: 2012 Local de Publicação: Maringá, PR Orientador: Prof.ª Dr.ª Maria Aparecida Fernandez Instituição: Universidade Estadual de Maringá. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento Nível: Dissertação (mestrado em Genética e Melhoramento)/ UEM: Departamento de Agronomia

Responsavel: zenaide
Categoria: Aplicação
Formato: Documento PDF
Arquivo: m-crnsaez.pdf
Tamanho: 1475 Kb (1510843 bytes)
Criado: 30-08-2014 09:18
Atualizado: 30-08-2014 09:27
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