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Consultar: Programa de Ps-Graduao em Cincias da Sade

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Ttulo [PT]: Efeitos da combinao de antimicrobianos e inibidores de bomba de efluxo na morfologia e expresso gnica em Mycobacterium tuberculosis
Autor(es): Katiany Rizzieri Caleffi Ferracioli
Palavras-chave [PT]:

M. Tuberculosis. Microscopia eletrnica de varredura. Expresso gnica. Combinao de medicamentos. Verapamil. Protenas de membrana transportadoras. Resazurin drugs combination microtier assay (REDCA). Brasil.
Palavras-chave [EN]:
M. Tuberculosis. Resazurin drugs combination microtier assay (REDCA). Scanning electron microscopy. Gene expression. Combination of drugs. Verapamil. Membrane transport proteins. Brazil.
rea de concentrao: Doenas Infecciosas e Parasitrias
Titulao: Doutor em Cincias da Sade
Banca:
Rosilene Fressatti Cardoso [Orientador] - UEM
Fernando Rogrio Pavan - UNESP
Jane Martha Graton Mikcha - UEM
Regiane Bertin de Lima Scodro - UEM
Eliana Valeria Patussi - UEM
Resumo:
Resumo: Este trabalho teve por objetivo primeiramente propor um ensaio para facilitar a avaliao da combinao de frmacos contra Mycobacterium tuberculosis (Mtb) e, posteriormente, avaliar os efeitos da combinao de rifampicina (RIF), isoniazida (INH) ou etambutol (EMB) com inibidores de bomba de efluxo (IBEs), a morfologia e o perfil transcricional de genes que codificam para bombas de efluxo (BEs) em Mtb H37Rv exposto a uma especfica combinao de frmacos. Os resultados esto apresentados em dois artigos: "Fast detection of drug interaction in Mycobacterium tuberculosis by a checkerboard resazurin method" e "Morphological changes and differentially expressed efflux pump genes in Mycobacterium tuberculosis exposed to rifampicin and verapamil combination". No primeiro artigo, o ensaio Resazurin drugs combination microtiter assay (REDCA) foi proposto para avaliar o sinergismo em Mtb usando como modelo a combinao INH ou EMB com levofloxacino. Os resultados foram promissores para a combinao de EMB com levofloxacino o que a torna uma opo teraputica com vista a reduzir os efeitos adversos do EMB. O segundo artigo avaliou a atividade in vitro de RIF, INH ou EMB com IBEs (verapamil (VP) e carbonil cianeto m-clorofenil-hidrazona) isoladamente por Resazurin Microtiter Assay Plate (REMA) e em combinao por REDCA em Mtb H37Rv. A inibio das BEs foi avaliada pelo ensaio de acumulao de brometo de etdeo. O crescimento, a morfologia e a expresso de genes que codificam para BEs foram avaliados para a combinao RIF+VP que apresentou o menor ndice de frao inibitria por REDCA. No ensaio de curva de tempo de morte bacteriana, a contagem de clulas viveis aps exposio RIF+VP foi similar a obtida pela exposio RIF. Enrugamento e arredondamento celular foram as principais alteraes morfolgicas observadas pela microscopia eletrnica de varredura aps exposio RIF e VP, respectivamente. Os efeitos da combinao RIF+VP no bacilo parecem ser uma somatria das mudanas morfolgicas citadas anteriormente. Foi observada expresso aumentada de alguns genes que codificam para BEs na presena de RIF e diminuio dos mesmos na presena da combinao RIF+VP, aps 72h de exposio, no ensaio de PCR em tempo real. O presente estudo evidenciou que o melhor efeito da combinao de frmacos em Mtb H37Rv ocorreu com RIF+VP, a qual sugere vantagens sobre a RIF isoladamente que compe a terapia convencional para tuberculose, incluindo a diminuio na resistncia mediada por BEs.

Abstract: This work aimed in a first moment to propose an assay to easily evaluate drug combination action against Mycobacterium tuberculosis (Mtb) and second, evaluate the effects of rifampicin (RIF), isoniazid (INH) and ethambutol (EMB) with efflux pump inhibitors (EPIs), the morphology and transcriptional profile of genes encoding efflux pumps (EPs) in Mtb H37Rv exposed to specific drug combination. The results are presented in two articles: combination in Mtb H37Rv "Fast detection of drug interaction in Mycobacterium tuberculosis by the checkerboard resazurin method" and "Morphological changes and efflux pump genes differentially expressed in Mycobacterium tuberculosis exposed to rifampicin and verapamil combination." At first article, Resazurin combination drugs microtiter assay (REDCA) was proposed to evaluate the drug synergism in Mtb using as model the INH or EMB with levofloxacin drugs combination. The results were promising for levofloxacin and EMB combination, which turn it a therapeutic option to reduce EMB adverse effects. The second article evaluated the in vitro activity of individual RIF, INH, EMB and EPIs (verapamil (VP) and carbonyl cyanide m-chlorophenyl-hydrazone) by Resazurin Microtiter Plate Assay (REMA) and the combinations of anti-tuberculosis drugs with EPI by REDCA in Mtb H37Rv. EPs inhibition was assessed by the accumulation of ethidium bromide assay. The growth, morphology and expression of genes encoding for EPs were evaluated for RIF+VP combination that had the lowest fractional inhibitory concentration index by REDCA. In the bacterial time kill curve assay, a viable cell count after exposure to RIF+VP combination was similar to RIF assay. Wrinkled and rounding cells were the main morphological changes observed by scanning electron microscopy after RIF and VP exposure, respectively. The effects of RIF+VP combination appeared to be a summation of the above mentioned changes. Overexpression of some EP genes to RIF and decrease to RIF+VP, after 72 h of exposure, was observed by Real-time PCR. The present study demonstrated that the best drug combination effect in Mtb H37Rv occurred with RIF+VP, which suggest it to provide advantages over the individual RIF that compose the conventional therapy for tuberculosis, including a decrease in resistance mediated by EPs.
Data da defesa: 27/06/2014
Cdigo: vtls000220757
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2014
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Rosilene Fressatti Cardoso
Instituio: Universidade Estadual de Maring . Centro de Cincias da Sade
Nvel: Tese (doutorado em Cincias da Sade)
UEM: Programa de Ps-Graduao em Cincias da Sade

Responsavel: edson
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Katiany Caleffi Ferracioli.pdf
Tamanho: 5129 Kb (5252391 bytes)
Criado: 18-05-2016 17:28
Atualizado: 18-05-2016 17:41
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