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Ttulo [PT]: Atividade antileishmania de extrato bruto e de substncias isoladas de Porophyllum ruderale (Jacq.) Cass. em Leishmania amazonensis
Ttulo [EN]: Antilieshmanial Activity of Crude Extract and Isolated Compounds from Porophyllum ruderale (Jacq.) Cass. in Leishmania amazonensis
Autor(es): Helena Teru Takahashi
Palavras-chave [PT]:

Porophyllum ruderale (Jacq.) Cass. Atividade antileishmania. Leishmaniose. Leishmania amazonensis. Derivados tiofnicos. Brasil.
Palavras-chave [EN]:
Antileishmanial activity. Porophyllum ruderale (Jacq.) Cass. Thiophene. Derivatives. Brazil.
Titulao: Doutor em Cincias Farmacuticas
Banca:
Celso Vataru Nakamura [Orientador] - UEM
Juliana Rodrigues
Maria Helena Sarragiotto
Sueli de Oliveira Lautenschlager
Sueli Fumie Yamada Ogatta
Resumo:
Resumo: Leishmanioses so doenas causadas por protozorios do gnero Leishmania. Esse grupo de doenas tem distribuio mundial nos cinco continentes, ocorre em 88 pases e prevalente nas regies tropicais e subtropicais. A OMS estima que 2 milhes de novos casos ocorrem anualmente. So amplamente classificadas em Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e Visceral (LV). No Brasil, a LTA uma das afeces dermatolgicas que merece mais ateno, devido sua magnitude, assim como pelo risco de ocorrncia de deformidades que pode produzir no ser humano. A quimioterapia para esta doena baseia-se, principalmente, nos antimoniais pentavalentes, mas tambm na anfotericina B e pentamidinas como frmacos de segunda escolha. O desafio ainda grande em relao descoberta de um frmaco ideal (de baixo custo, eficiente, de fcil administrao e com baixa toxicidade) e pela sua farmacocintica, devido natureza intracelular e localizao disseminada do parasita. Portanto, h uma necessidade urgente do desenvolvimento de uma farmacoterapia adequada, sendo a pesquisa de substncias bioativas em espcies de plantas, uma alternativa interessante, uma vez que o Brasil apresenta uma vasta biodiversidade. Dentre as plantas, destaca-se a espcie Porophyllum ruderale (Jacq.) Cass., empregada popularmente sobre leses causadas por protozorios do gnero Leishmania. Os objetivos deste trabalho foram: preparar o extrato bruto de partes areas de P. ruderale, fracionar e isolar substncias; avaliar a atividade antileishmania e citotoxicidade do extrato bruto e substncias isoladas de P. ruderale e verificar o efeito dessas substncias sobre amorfologia, a ultraestrutura, e sobre a membrana mitocondrial e citoplasmtica de L. amazonensis. O extrato bruto apresentou valores de CI50 de 60,39,2 e v77,77,7 μg/mL, respectivamente, sobre as formas promastigota e amastigota axenica de L. amazonensis. Foram isolados e identificados, atravs de mtodos cromatogrficos, espectroscpicos e espectrometria de massa, dois derivados tiofnicos: 5-metil-2,2:5,2-tertiofeno (composto A) e 5-metil-[5-(4-acetxi-1-butinil)]-2,2bi-tiofeno (composto B). A CC50 do extrato diclorometano sobre macrfagos J774G8 foi de 50050 μg/mL. O composto A apresentou valores de CI50 de 7,71,7; 19,04,7 e 370 μg/mL para as formas promastigota, amastigota axnica e amastigota intracelular de L. amazonensis, respectivamente. A CC50 sobre macrfagos J774G8 foi de 37050 μg/mL. O composto B apresentou valores de CI50 de 21,34,4; 28,72,6 e 510 μg/mL para as formas promastigota, amastigota axnica e amastigota intracelular de L. amazonensis, respectivamente. A CC50 sobre macrfagos J774G8 foi de 33515 μg/mL. Os compostos A e B apresentaram ndices hemolticos menores do que 10%, mesmo sob uma concentrao de 500 μg/mL. Clulas de L. amazonensis tratadas com os compostos A e B e marcadas com rodamina 123 indicaram despolarizao na membrana mitocondrial causada pelo composto A. Por outro lado, o tratamento com os compostos A e B e a marcao com iodeto de propdio no indicaram alterao na membrana citoplasmtica. O tratamento de clulas de L. amazonensis com o composto A causou alteraes morfolgicas quando visualizadas sob Microscopia Eletrnica de Varredura (MEV) e a Microscopia Eletrnica de Transmisso (MET) indicou alterao ultraestrutural na mitocndria do parasito. Clulas de L. amazonensis tratadas com o composto B indicaram alteraes morfolgicas pela MEV, porm, no foram evidenciadas alteraes ultraestruturais pela MET. Estudos adicionais devem ser realizados para a elucidao do mecanismo de ao dos derivados tiofnicos isolados da espcie P. ruderale, o que poder contribuir para odesenvolvimento de novos frmacos para o tratamento das leishmanioses.

Abstract: Leishmaniasis are diseases caused by protozoa of the genus Leishmania. This group of diseases have a worldwide distribution on five continents, occurs in 88 countries and is prevalent in tropical and subtropical regions. The WHO estimates that 2 million new cases occur annually. They are classified in American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) and Visceral Leishmaniasis (VL). In Brazil, the American cutaneous leishmaniasis is one of dermatological disorders that deserves more attention because of its magnitude, as well as the risk of deformities that can produce in human. The chemotherapy for this disease is mainly based on pentavalent antimonials, but amphotericin B and pentamidine can be used as second choice. The challenge is still large in relation to the discovery of an ideal drug (low cost, efficient, easy administration and low toxicity) and its pharmacokinetics, because of the widespread nature and location of the intracellular parasite. So, there is an urgent need to develop an appropriate drug therapy and the study of bioactive substances in plant species, an interesting alternative, since Brazil has a wide biodiversity. Among plants, there is the kind Porophyllum ruderale (Jacq.) Cass., commonly used on injuries caused by protozoa of the genus Leishmania. The objectives of this work were to prepare the crude extract of aerial parts of P. ruderale, fractionate and isolate substances; to evaluate the antileishmanial activity and cytotoxicity of crude extract and isolated compounds from P. ruderale and to check the effect of these compounds on morphology, ultrastructure, mitochondria and cytoplasmic membrane of L. amazonensis. The crude extract showed IC50 values of 60.39.2 and 77.77.7 μg/mL, respectively, against promastigote and axenic amastigote forms. We isolated and identified by chromatographic and spectrometric methods and mass spectroscopy, two thiophenes derivatives: 5-methyl-2, 2 ': 5', 2''-terthiophene (compound A) and 5'-methyl-[5-(4-acetoxy-1-butinil)] -2,2 'bi-thiophene (compound B). The CC50 value of dichloromethane extract was 50050 μg/mL on J774G8 macrophages. Compound A showed IC50 values of 7.71.7, 19.04.7 and 370 μg/ml for promastigote, axenic amastigote and intracellular amastigote forms of L. amazonensis, respectively, and CC50 value of 37050 μg/mL on J774G8 macrophages. The compound B showed IC50 values of 21.34.4, 28.72.6 and 510 μg/ml for promastigotes, axenic amastigote and intracellular amastigote L. amazonensis, respectively, and CC50 value of 33515 μg/ml on J774G8 macrophages. The compounds A and B showed hemolytic index lower than 10%, at a concentration of 500 μg/mL. Cells of L. amazonensis treated with compounds A and B and labeled with rhodamine 123 indicated mitochondrial membrane depolarization caused by the compound A. On the other hand, treatment with compounds A and B and labeling with propidium iodide indicated no change in the cytoplasmic membrane. Treatment of cells of L. amazonensis with compound A caused morphological changes under a scanning electron microscope (SEM) and Transmission Electron Microscopy (TEM) indicated ultrastructural changes in mitochondria of the parasite. Cells of L. amazonensis treated with compound B showed morphological changes by SEM, however, there were no ultrastructural changes by TEM. Further studies should be realized to elucidate the mechanism of action of thiophenes derivatives isolated from the species P. ruderale, which may contribute to the development of new drugs for the treatment of leishmaniasis.
Data da defesa: 30/08/2011
Cdigo: vtls000221195
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2011
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Celso Vataru Nakamura
Co-Orientador: Prof. Dr. Joo Carlos Palazzo de Mello
Instituio: Universidade Estadual de Maring. Centro de Cincias da Sade
Nvel: Tese (doutorado em Cincias Farmacuticas)
UEM: Programa de Ps-graduao em Cincias Farmacuticas

Responsavel: elaine
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Dissertao Helena Teru Takahashi.pdf
Tamanho: 1795 Kb (1838415 bytes)
Criado: 16-06-2016 14:27
Atualizado: 17-06-2016 09:21
Visitas: 1442
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