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Consultar: Programa de Pós-Graduação em Física (Acadêmico)

Título [PT]: Espectroscopia vibracional para avaliação ex vivo da dinâmica das ações induzidas por fungos patogênicos em tecidos biológicos
Autor(es): Gutierrez Rodrigues de Morais
Palavras-chave [PT]:

Física da matéria condensada. Fenomenos fototêrmicos. Espectroscopia no infravermelho. Espectroscopia fotoacustica. Brasil.

Mauro Luciano Baesso [Orientador] - UEM Luis Humberto da Cunha Andrade - UEMS João Carlos Silos Moraes - USP Jurandir Hillmann Rohling - UEM Terezinha Inez Estivalet Svidzinski - UEM

Resumo: Neste trabalho a Espectroscopia FTIR com detecção fotoacústica (FTIR-PAS) e a Espectroscopia Raman foram utilizadas para estudar, em camundongos Swiss, a dinâmica das mudanças estruturais de tecidos, no pulmão e fígado, após infecção com Paracoccidioides brasiliensis (Pb), e na pele, após inoculação intradérmica de metabólitos produzidos por Fusarium oxysporum. O estudo histológico das amostras foi realizado para validação dos resultados. Os experimentos foram realizados ex vivo e foram avaliadas as alterações nas bandas de absorção óptica e de espalhamento Raman, no pulmão, no fígado e na pele, em função do tempo. O estudo foi dividido em quatro partes: 1ª) os espectros Raman de pulmões de camundongos Swiss infectados por Pb foram correlacionados à expressão temporal da glicoproteína gp43, à ocorrência de morte celular programada e às alterações morfológicas no órgão. As analises foram realizadas 1, 2, 4 e 8 semanas após a infecção. As bandas mostraram que a infecção foi mais intensa na 1ª e na 4ª semana, e a maior expressão de gp43 foi concomitante com a maior imunocoloração para TUNEL; 2ª) as alterações nos pulmões infectados com Pb foram avaliadas com a técnica FTIR-PAS. Os resultados mostraram que as mudanças nas bandas de absorção relacionam com alterações morfológicas, que foram dependentes do período de infecção; 3ª) a técnica FT-Raman foi utilizada para avaliação da paracoccidioidomicose no fígado de camundongos Swiss infectado com Pb. As alterações ocorreram nas regiões espectrais entre 1700-1530 cm-1 e 1370 - 1290 cm-1, nos picos da fenilalanina e das moléculas CH2 e CH3 correlacionadas ao colágeno. A resposta dos tecidos foi caracterizada pelo desenvolvimento de granulomas organizados e infecção disseminada, com leveduras localizadas dentro dos macrófagos e hepatócitos isolados; 4ª) neste estudo as inoculações da fração F1 na pele de ratos saudáveis foram realizadas 3, 6, 12 e 24 horas após a aplicação de uma fração (F1) contendo metabólitos produzidos por F. oxysporum. As áreas ocupadas na derme dos colágenos tipo I e III aumentaram ao longo do período de infecção. Houve mudança na área da banda da amida I e naquela das moléculas CH2 e CH3. Em conclusão, os resultados deste trabalho mostraram que as técnicas FTIR e Raman podem ser combinadas para avaliação da dinâmica das alterações nos tecidos biológicos sobre a ação de agentes patógenos, sendo promissoras para novas formas de diagnóstico de doenças. Abstract: In this work the FTIR technique with photoacoustic (FTIR-PAS) detection and the Raman method were used to study the dynamic of the structural changes in lung and liver tissues of Swiss mice submitted to inoculation of the Paracoccidioide brasiliensis fungus (Pb), and in the skin of rats intradermic inoculated by a fraction F1 of Fusarium oxyporyum. Histological evaluation of the samples was performed to validate the results. The experiments were performed ex vivo and as a function of the infection period, evaluating the changes in both optical absorption bands and Raman scattering induced by these pathogens. The study was divided into four parts: 1ª) the Raman spectra of lungs of Swiss mice infected with Pb were correlated with the temporal expression of the gp43 glycoprotein, the apoptosis and the morphological changes. Analyses were performed after 1, 2, 4 and 8 of infection. The bands showed that infection was more intense in the 1st and 4th weeks, and gp43 expression was concomitant with most immunostaining for TUNEL. 2ª) changes in lungs infected with Pb were also evaluated with the FTIR-PAS technique. The results showed that changes in the absorption bands resulted from morphological changes, which were dependent on the infection period. 3ª) FT-Raman technique was used to evaluate the paracoccidioidomycosis in liver of Swiss mice infected with Pb. Changes occurred in the spectral region between 1700-1530 cm-1 and 1370-1290 cm-1, the peaks of phenylalanine and CH2 and CH3 molecules of the collagen. The tissue response resulted in the development of granulomas with yeasts located within macrophages and isolated hepatocytes. 4ª) in this study F1 fraction inoculations were performed in the skin of healthy rats 3, 6, 12 and 24 hours after application of the fraction. The areas of collagens type I and III increased throughout the infection period. There were changes in the areas of the amide I and CH2 and CH3 bands. In conclusion, the present results show that the FTIR, FTIR-PAS and Raman techniques can be combined for evaluation of the dynamics of changes in biological tissues invaded by pathogens, being a promising new way of disease diagnosis.

Idioma: Português Data de Publicação: 2016 Local de Publicação: Maringá, PR Orientador: Prof. Dr. Mauro Luciano Baesso Co-Orientador: Prof.ª Dr.ª Luzmarina Hernandes Instituição: Universidade Estadual de Maringá. Centro de Ciências Exatas. Programa de Pós-Graduação em Física Nível: Tese (doutorado em Física) UEM: Departamento de Física

Responsavel: edson
Categoria: Aplicação
Formato: Documento PDF
Arquivo: gutierrez_rodrigues_de_morais_2016.pdf
Tamanho: 1989 Kb (2036514 bytes)
Criado: 27-03-2017 10:12
Atualizado: 27-03-2017 10:28
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