Resumo: A ocorrência de grãos ardidos é um indicador importante da qualidade do milho. Embora diversos fungos com potencial toxigênico estejam associados a grãos ardidos, pouco se sabe em relação à composição das espécies fúngicas e dos fatores que influenciam a composição dessas espécies nas diferentes regiões produtoras de milho do país. Tais informações são importantes no estudo de medidas de redução de grãos ardidos e micotoxinas no milho. Assim, este estudo analisou as espécies de fungos com potencial toxicogênico em amostras de grãos ardidos, oriundas de duas safras e três locais de cultivo, e onze híbridos de milho. Para a quantificação dos fungos presentes nas amostras foi utilizado o teste de Blotter, com a identificação morfológica dos gêneros Fusarium, Aspergillus, Penicillium e das espécies Stenocarpella maydis (= Diplodia maydis) e S. macrospora (= D. macrospora). A identificação das espécies de Fusarium foi realizada por PCR com primers espécie-específicos e sequenciamento parcial do gene tef-1. Isolados das espécies F. verticillioides, Fusarium sp., outras espécies do complexo F. fujikuroi e espécies não identificadas foram caracterizados filogeneticamente com base em sequências de DNA do gene tef-1 (~ 650 pb). Os resultados da incidência de fungos nas amostras de grãos ardidos pelo teste de Blotter foram analisados como experimento fatorial, com os seguintes fatores: safra (2011/12 e 2012/13), local (Arapoti, Castro e Tibagi) e híbridos de milho (onze híbridos comerciais). Foram observados efeitos significativos (P≤0,05) de safra, local e genótipos, e das interações entre esses fatores, na incidência de todos os fungos analisados exceto para S. maydis, para o qual o efeito do fator safra não foi significativo. A incidência de fungos nos grãos ardidos não está relacionada com a incidência de grãos ardidos nas amostras analisadas. Os índices de incidência de Fusarium spp. variaram de 8,6 a 19,9%; de S. macrospora de 0 a 22,4%; de S. maydis de 0,5 a 2,9%; de Penicillium spp. de 1,6 a 6,9 e de Aspergillus spp. de 0,1 a 2,5%. A identificação molecular de espécies de Fusarium, realizada com base na análise de culturas monospóricas obtidas de grãos ardidos de dois híbridos na safra 2012/13 e de quatro híbridos na safra 2014/15, em dois locais (Castro e Arapoti), revelou que em ambas as safras, a espécie predominante foi F. verticillioides (92,6 e 92,3%) em Arapoti e (56,7 e 51,6%) em Castro; seguido por Fusarium sp. (7,4 e 7,7%) em Arapoti e (20,0 e 18,8%) em Castro, outras espécies do complexo F. fujikuroi (0,0 %) em Arapoti e (13,3 e 28,1%) em Castro, F. proliferatum (0,0%) em Arapoti e (3,3 e 0,0%) em Castro, Fusarium incarnatum (0,0%) em Arapoti e (0,0 e 1,6%) em Castro. A análise filogenética com base em sequencias de DNA do gene tef-1α não mostrou evidências de estruturação de F. verticillioides em subpopulações; enquanto que para Fusarium sp. e outras espécies do complexo F. fujikuroi houve evidências de estruturação em subpopulações.
Abstract: The occurrence of rot or stained grains is an important indicator of the quality of maize. Several fungi with toxigenic potential are associated with damaged kernels, however little is known regarding the composition of species and the factors that influence the composition of species in the different regions that produce corn in the country. Such information is important in the study of measures of reduction of rot grains and mycotoxins in maize. This study analyzed the fungal species with toxicogenic potential in samples of rot grains, from different hybrids grown in three locations in Paraná, in two crops. For quantification of genera and species of fungi present in the samples was employed Blotter test with morphological identification of Fusarium, Aspergillus, Penicillium and species Stenocarpella maydis (= Diplodia maydis) and S. macrospora (= D. macrospora). The identification of Fusarium species was performed by PCR with species-specific primers and partial sequencing of TEF-1 gene. Isolates of the species F. verticillioides, Fusarium sp., other species of F. fujikuroi complex and non-identified species were phylogenetically characterized by DNA sequences of the TEF-1 gene (~ 650 pb). The analysis of the incidence of fungi in rot grain samples by Blotter test were subjected to statistical analysis of factorial experiments, in which the factors considered were: crop year (2011/12 and 2012/13), local (Arapoti, Castro and Tibagi) and corn hybrids (eleven commercial hybrids). There was a significant effect (p≤0.05) of the crop, location and genotypes, and the interactions between these factors, on the incidence of all the fungi analized except to S. maydis, for wich the effect of the crop year were not significant. The incidence of fungi in rot grains is not related with the incidence of rot grains in the analized samples. The rates of these fungi ranged from 8.6 to 19.9% for Fusarium spp; 0 to 22.4% for S. macrospora; 0.5 to 2.9% S. maydis; 1.6 to 6.9 for Penicillium spp; and from 0.1 to 2.5% for Aspergillus spp. The molecular identification of Fusarium species was based on spore isolates obtained from analysis of rot grains of two hybrids in the crop 2012/13 and four hybrids in the crop 2014/15 at two sites (Castro and Arapoti), showed that for both crops, the predominant species was F. verticillioides (92.6 and 92.3%) in Arapoti, and (56.7 and 51.6%) in Castro, followed by Fusarium sp. (7.4 to 7.7%) in Arapoti, and (20.0 and 18.8%) in Castro, other species of the F. fujikuroi complex (0.0%) in Arapoti, and (13.3 to 28.1%) in Castro, F. proliferatum (0.0%) in Arapoti and (3.3 and 0.0%) in Castro, Fusarium incarnatum (0.0%) in Arapoti and (0.0 and 1.6%) in Castro. The phylogenetic analysis based on DNA sequences of the TEF-1 gene did not show evidence of structuring of F. verticillioides in subpopulations; while for Fusarium sp.e other species of F. fujikuroi complex was evidence of structure in subpopulations. |