Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar os sintomas da infecção simples e mista em quatro hospedeiras distintas de um isolado do Cucumber mosaic vírus e de um Tobamovirus de tomateiro, provenientes de Marialva - PR. Também foi avaliada a concentração relativa de cada vírus nestas hospedeiras, por meio do teste DAS-ELISA. Inicialmente, a espécie TMV foi identificada, utilizando antissoros para o TMV e ToMV, com os ensaios de DAS-ELISA. Nos testes de RT-PCR, foram obtidas amplificações de aproximadamente 400 pb com primers para o TMV. As análises de similaridade da sequência do TMV de Marialva-PR com outras seqüências depositadas no GenBank apontaram a identidade de 100% com um isolado procedente de Sapopema - PR (TMV-PR). Posteriormente, foram realizadas inoculações simples e mistas do TMV, com um isolado do CMV de Catharanthus roseus, cuja espécie viral havia sido determinada previamente. A infecção mista desses vírus resultou na expressão mais severa dos sintomas, evidenciando a interação sinergística de ambos. Tanto o teste DAS-ELISA como a RT-PCR foram eficientes na detecção do TMV e CMV nas infecções simples e mistas em plantas de tomate, pimentão, fumo e de Gomphrena globosa. O protocolo de RT-PCR multiplex mostrou eficiência nas detecções em infecções mistas e com as amplificações específicas de cada vírus ficou demonstrada a aplicabilidade do método na diagnose de rotina, visando à certificação fitossanitária de hortaliças.
Abstract: The objective of this study was to evaluate the symptoms of single and mixed infections in four different hosts induced by an isolate of Cucumber mosaic virus, and by a tomato Tobamovirus isolate from Marialva-PR. We also evaluated the relative concentration of each virus in these hosts, by DAS-ELISA tests. Initially, the species of Tobamovirus was identified using antiserum specific to TMV and ToMV through DAS-ELISA assays, and through RT-PCR with the amplification of approximately 400 bp with primers for TMV. Analysis of the sequence similarity of TMV Marialva-PR with other sequences deposited in GenBank, showed a 100% identity with an isolate originating from Sapopema, Paraná (TMV-PR). Subsequently, simple and mixed inoculations were made with TMV and an isolate of CMV from Catharanthus roseus, whose viral species had been previously determined. Mixed infection of these viruses resulted in the most severe expression of symptoms, demonstrating the synergistic interaction of both viruses. DAS-ELISA tests, such as RT-PCR were efficient for TMV and CMV detection, in single and mixed infections in tomato, pepper, tobacco and Gomphrena globosa. The multiplex RT-PCR protocol was efficient for mixed infection detections, and specific amplifications of each virus demonstrated the applicability of the method for the routine diagnosis for phytosanitary certification of horticultural crops. |
