Resumo: Este trabalho teve como objetivos padronizar um método de multiplicação in vitro de bananeiras, indexá-las para o vírus do mosaico do pepino (Cucumber mosaic virus - CMV) e para o vírus das estrias da bananeira (Banana streak vírus - BSV) por meio do teste sorológico DAS-ELISA. A presença destes vírus também foi detectada por PCR em amostras de bananeiras colhidas em áreas de produção da região Norte do Paraná, o que serviu para a caracterização molecular parcial dos isolados. A micropropagação in vitro de bananeiras do grupo Cavendish resultou na produção de 3.653 mudas a partir de 151 gemas, sendo que a maior produção foi obtida com os rizomas originários de perfilhos medindo de 20 a 60 cm. O CMV e o BSV foram detectados tanto nas amostras de plantas provenientes das áreas de cultivo, como em 47% das 53 plantas obtidas por micropropagação. O seqüenciamento do produto de amplificação por RT-PCR permitiu classificar o isolado de CMV obtido de bananeira no subgrupo IA. A amplificação por círculo rolante (RCA) utilizada nos protocolos para a detecção de formas episomais do BSV resultou na amplificação de aproximadamente 7,5 Kpb. Após o seqüenciamento genômico parcial de uma região do DNA amplificado por RCA e comparações realizadas com sequências de espécies de BSV reconhecidas pelo ICTV e depositadas no GenBank, o isolado de BSV proveniente de Andirá foi identificado como sendo da espécie Banana streak Obino I´Ewai virus (BSOLV), com 99% de homologia. Pode-se concluir com este trabalho que o Cucumber mosaic virus e o Banana streak virus estão presentes em áreas de cultivo de bananeiras do Norte do Paraná, em infecção simples e mistas, evidenciando assim, a importância da indexação viral para a garantia de qualidade fitossanitária dos bananais da região.
Abstract: The objective of this study was to standardize a method for in vitro multiplication of banana seedlings, and indexing for Cucumber mosaic virus (CMV) and Banana streak virus (BSV) through serological DAS-ELISA tests. Both virus were also detect by PCR, on samples taken from production areas of northern Paraná, seeking partial molecular characterization of viral isolates. The in vitro micropropagation of Cavendish bananas resulted in the production of 3653 seedlings from 151 gems, and the highest production was obtained with the rhizomes from tillers measuring 20-60 cm. The CMV and BSV were detected from plant samples collected in banana growing areas, as in 47% of the 53 plants obtained by micropropagation. Sequencing of the amplification product obtained by RT-PCR allowed the classification of the CMV isolate in the subgroup IA. The rolling circle amplification (RCA) used in protocols for detection of BSV episomal forms resulted in the amplification of approximately 7,5 Kbp. After partial sequencing of the RCA product and comparisons with sequences of BSV deposited in GenBank, the virus isolate from Andirá was identified as a species of Banana streak virus Obino I'Ewai (BSOLV) with 99% homology.This work indicated that CMV and BSV were found in single and in mixed infections in production áreas of northern Paraná, evidencing the importance of viral indexing for the fitossanitary quality of banana produced in this region. |
