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Consultar: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde

Título [PT]: Avaliação da expressão gênica de bombas de efluxo em Mycobacterium tuberculosis após exposição à rifampicina e verapamil em ambiente intramacrofágico
Autor(es): Pedro Henrique Canezin
Palavras-chave [PT]:

Mycobacterium tuberculosis. Células THP-1. Verapamil. Rifampicina. Bombas de efluxo. Expressão gênica. Tuberculose. Brasil.

Mycobacterium tuberculosis. THP-1. Verapamil. Rifampicin. Efflux pumps. Gene expression. Brazil.

Rosilene Fressatti Cardoso [Orientador] - UEM Fernando Rogério Pavan - UNESP Regiane Bertin de Lima Scodro - UEM

Resumo: A tuberculose (TB) é uma doença infectocontagiosa causada pelo bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb). A resistência do bacilo aos medicamentos comumente utilizados no tratamento da TB vem crescendo e recebem a denominação de TB multidroga-resistente (MDR), que é causada por Mycobacterium tuberculosis resistente à rifampicina e à isoniazida e TB extensivamente resistente (XDR), quando o bacilo apresenta resistência adicional a qualquer fluoroquinolona e a pelo menos um dos três medicamentos injetáveis de segunda linha. O crescente reconhecimento de TB-MDR/XDR provocou o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas utilizando novos e antigos fármacos. Além da resistência intrínseca devido a constituição da parede celular e mutações em genes, o sequenciamento do genoma de Mtb mostrou que o bacilo apresenta constitutivamente várias bombas de efluxo (BEs) responsáveis pelo bombeamento de íons, moléculas e fármacos para fora do ambiente bacilar. Existem substâncias capazes de inibir esse sistema de efluxo, fazendo com que o fármaco permaneça dentro do bacilo causando a morte do mesmo, tais como Verapamil (VP). Alguns autores relataram uma relação entre BEs e a capacidade de Mtb superar o estresse oxidativo no interior dos macrófagos. Por isso, o modelo de infecção de células THP-1 por Mtb vem sendo utilizado para avaliação da resistência bacilar após sua exposição ao ambiente macrofágico. Desta forma, esse estudo visou avaliar a expressão gênica de BEs em ambiente macrofágico na exposição a RIF e VP sozinhos e combinados, em 24 h e 72 h. As células THP-1 foram infectadas com Mtb H37Rv e expostas a RIF, VP e RIF+VP em 24 h e 72 h. A reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) foi realizado utilizando o master mix PCR SYBR green no equipamento StepOne™. Em 24 h de exposição aos fármacos, observou-se uma superexpressão da maioria das BEs na exposição ao RIF, VP e RIF+VP. No entanto, às 72 h foi observada ausência de expressão da maioria das BEs, inclusive na combinação RIF+VP. Nesse sentido, estudos adicionais in vivo poderiam trazer novas informações sobre a ação de RIF+VP no bacilo. Logo, essa combinação poderia indubitavelmente auxiliar na terapia contra MTB-MDR. Abstract: Tuberculosis (TB) is an infectious disease caused by the bacillus Mycobacterium tuberculosis (Mtb). Multidrug-resistant TB (MDR) is caused by rifampicin and isoniazid resistant Mycobacterium tuberculosis, while in the extensively resistant TB (XDR), the bacillus presents additional resistance to any fluoroquinolone and to at least one of the three second-line injectables (amikacin , Kanamycin or capreomycin). The growing recognition of MDR / XDR-TB has led to the development of new therapeutic strategies using new and old tuberculostatic drugs. In cases of MDR-TB, as well as for XDR-TB, specialized and individualized treatment is advocated. Mtb presents intrinsically resistance to some drugs by the constitution of membrane rich in fatty acids. Thus, the main mechanism of resistance involves mutations in genes involved in the metabolism of anti-TB drugs. Recently, the sequencing of the Mtb genome showed that the bacillus constitutively presents several efflux pumps (EPs) responsible for pumping ions, molecules and drugs out of the bacillary environment. There are substances capable of inhibiting this efflux system, causing the drug to remain within the bacillus and its death, such as Verapamil (VP). Some authors have reported a relationship between EPs and the ability of Mtb to overcome oxidative stress within macrophages. Therefore, the model of infection of THP-1 cells by Mtb has been used to evaluate the bacillary resistance after its exposure to the macrophagic environment. Thus, this study aimed to evaluate the gene expression of EPs in macrophagic environment at exposure to RIF, VP and RIF+VP in 24 h and 72 h. THP-1 cells were infected with Mtb H37Rv and exposed to RIF, VP and RIF+VP in 24 h and 72 h. The qPCR was performed using the master SYBR green PCR mix in the StepOne™ Real Time PCR System. At 24 h of drug exposure, an overexpression of the majority of BEs was observed in exposure to RIF, VP and RIF+VP. However, at 72 h there was an absence of expression of most BEs, including the RIF+VP combination. In this sense, additional in vivo studies could bring new information about the action of RIF+VP in the bacillus. Therefore, this combination could undoubtedly aid mtb-MDR therapy.

Idioma: Português Data de Publicação: 2017 Local de Publicação: Maringá, PR Orientador: Prof.ª Dr.ª Rosilene Fressatti Cardoso Instituição: Universidade Estadual de Maringá . Centro de Ciências da Saúde Nível: Dissertação (mestrado em Ciências da Saúde) UEM: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde

Responsavel: edson
Categoria: Aplicação
Formato: Documento PDF
Arquivo: Dissertação de Mestrado.pdf
Tamanho: 1409 Kb (1443318 bytes)
Criado: 19-06-2017 18:52
Atualizado: 19-06-2017 18:59
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