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Consultar: Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas

Título [PT]: Efeitos da intoxicação e abstinência de etanol sobre os parâmetros neuroinflamatórios em regiões mesencefálicas relacionadas à ansiedade em ratos
Título [EN]: Effects of ethanol intoxication and withdrawal on neuroinflammatory parameters in anxiety-related midbrain areas in rats
Autor(es): Vivian Taciany Bobassoli
Palavras-chave [PT]:

Farmacologia. Terapêutica. Etanol. Intoxicação. Ratos. Abstinência. Neuroinflamaçâo. Ansiedade. Óxido nítrico. Brasil

Ethanol. Intoxication. Withdrawal. Neuroinflammation. Anxiety. Nitric oxide. Rats. Brazil.

Rúbia Maria Monteiro Weffort de Oliveira [Orientador] - UEM Vanessa Beijamini Harres - UFES Simone Marques Bolonheis de Campos - UNINGÁ Célia Regina Ambiel Silva - UEM Ciomar aparecida Bessani Amado - UEM

Resumo: O presente estudo teve por objetivo investigar os efeitos da intoxicação e abstinência de etanol sobre parâmetros neuroinflamatórios na substância cinzenta periaquedutal dorsolateral (SPCDL) e núcleo dorsal da rafe (NDR) de ratos, bem como avaliar os efeitos da inibição da óxido nítrico sintase (NOS) sobre a ansiedade decorrente da abstinência. No primeiro capítulo foram investigados os efeitos da intoxicação e abstinência de etanol sobre a ativação microglial e expressão de NOS induzida (iNOS) na SCPDL e NDR, os níveis de citocinas no mesencéfalo e os efeitos da administração sistêmica do inibidor seletivo da iNOS, diidrocloreto de N-([3-(aminometil) fenil] metil) etanimidamida (1400W), sobre o comportamento tipo ansioso na abstinência de etanol Ratos Wistar machos receberam uma dieta líquida contendo etanol 6-8 % (v/v) por 15 dias como única fonte de alimento e foram submetidos aos testes comportamentais imediatamente após última exposição (intoxicado) ou 24 h após a descontinuação do etanol (Abst). O grupo controle recebeu a mesma dieta sem etanol, mas acrescida de sacarose para o balanço energético. Três dias antes do fim da exposição à dieta iniciou-se a administração de salina i.p para os grupos controle e intoxicado; e salina ou 1400W para o grupo abstinente que foi subdividido em 4 subgrupos: Abst+Sal; Abst+1400W 0,75; 1,5 ou 3,0 μg/kg. Os tratamentos continuaram até o dia dos testes comportamentais os quais foram realizados na caixa claro/escuro e campo aberto. A expressão de OX-42, indicador de ativação microglial, e de iNOS foi avaliada na SCPDL e NDR por imunohistoquímica e os níveis de citocinas (IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, IFN-γ e GM-CSF) foram dosados no mesencéfalo pela técnica Luminex™ xMAP. Os animais abstinentes (Abst+Sal) apresentaram um efeito tipo ansiogênicos comparado com o controle. O tratamento com 1400W 1,5μg/kg diminuiu os efeitos tipo-ansiogênicos da abstinência de etanol. O grupo intoxicado apresentou um aumento na expressão de OX-42 e iNOS na SCPDL e NDR; enquanto o grupo Abst+Sal apresentou aumento apenas de OX-42 nas duas estruturas, quando comparado com o controle. O tratamento com 1400W não alterou a expressão de OX-42 ou iNOS comparado com o grupo Abst+Sal. Os níveis de citocinas não foram alterados em nenhum do grupos experimentais testados. Estes resultados sugerem que a intoxicação por etanol induz um estado inflamatório na SCPDL e NDR, o que pode estar relacionado com a manifestação do comportamento tipo ansioso induzido pela abstinência. No segundo capítulo foi investigada a hipótese de que o óxido nítrico (NO) na SCPDL estaria envolvido na expressão do comportamento tipo ansioso induzido pela abstinência de etanol. Ratos Wistar machos receberam uma dieta líquida contendo etanol 6-8 % (v/v) por 15 dias como única fonte de alimento e seis dias antes do fim da exposição tiveram uma cânula guia implantada diretamente na SCPDL. Vinte e quatro horas após o fim da exposição ao etanol, os animais receberam microinjeções do sequestrador de NO 2-(4-carboxifenil)-4,4,5,5-tetrametilimidazol-1-oxil-3-óxido (carboxi-PTIO), do inibidor não seletivo da NOS N-G-nitro-L-arginina metill éster (L-NAME), do inibidor seletivo para NOS neuronial (nNOS) 1-(2-trifluorometil] fenil) imidazol (TRIM), do inibidor seletivo iNOS, 1400W, ou de salina na SCPDL. Dez minutos depois os animais foram avaliados na caixa claro/escuro e campo aberto. Carboxi-PTIO (1 nmol), L-NAME (200 nmol), TRIM (20 nmol), e 1400W (0,3 e 1 nmol) diminuíram os efeitos tipo-ansiogênicos da abstinência de etanol em ratos avaliados na caixa claro escuro. O precursor de NO L-Arginina reverteu os efeitos do L-NAME. Estes resultados indicam que a produção de NO na SCPDL desempenha um papel na modulação do comportamento tipo ansioso induzido pela abstinência de etanol em ratos. Abstract: This study was aimed to investigate the effects of ethanol intoxication and withdrawal on neuroinflammatory parameters in dorsolateral periaquedutal gray matter (DLPAG) and dorsal raphe nucleus (DRN) in rats, as well to evaluate the effects of nitric oxide synthase (NOS) inhibition on ethanol withdrawal-induced anxiety. In the first chapter, we investigated whether the effects of ethanol intoxication and withdrawal on microglial activation and NOS inducible (iNOS) expression in DLPAG and NDR; cytokines levels in midbrain and effects of iNOS inhibitor, N-([3-(aminomethyl)phenyl] methyl) ethanimidamide dihydrochloride (1400W) on ethanol withdrawal-induced anxiety-like behaviour. Male Wistar rats were forced to consume a liquid diet containing ethanol 6–8 % (v/v) for 15 days as their only source of diet, then their behavior were tested immediately after last exposure (intoxicated) or 24 h ethanol withdrawal (WD). The control group received the same diet with sucrose instead ethanol for energetic balance. Three days before diet exposure ends, started treatment with (Sal) i.p. for intoxicated and control groups; and Sal or 1400W for withdrawn group (WD), which was subdivided in 4 subgroups: WD+Sal, WD+1400W 0,75; 1,5 or 3,0 μg/kg. The treatment persisted until testing day. OX-42 and iNOS expression were evaluated by immunohistochemistry and cytokines levels (IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, TNF-α, IFN-γ e GM-CSF) were analyzed by Luminex™ xMAP. Ethanol withdrawal (WD+Sal) promoted an anxiogenic-like effect compared to control. Treatment with 1400W 1,5 μg/kg decreased the anxiogenic-like effect induced by ethanol withdrawal. Intoxicated group showed OX-42 and iNOS expression increased, while WD+Sal showed only OX-42 increased in both regions compared with control. 1400W administration did not alter OX-42 or iNOS. Cytokine levels were not altered in any experimental groups. There results suggest ethanol intoxication promotes an inflammatory state in DLPAG and DRN, which may be related with ethanol withdrawal-induced anxiety-like behavior. In the second chapter, we investigated whether nitric oxide (NO) in the DLPAG is involved in the expression of ethanol withdrawal-induced anxiety-like behaviour. Male Wistar rats were implanted with guide cannulae aimed at the DLPAG. The animals were forced to consume a liquid diet containing ethanol 6–8 % (v/v) for 15 days as their only source of diet. Six days after surgery and 24 h after ethanol discontinuation, the animals received microinjections of the NO scavenger 2-(4-carboxyphenyl)-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3-oxide (carboxy-PTIO), nonselective nitric oxide synthase inhibitor NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME), selective neuronal nitric oxide synthase inhibitor 1-(2-trifluoromethyl]phenyl) imidazole (TRIM), selective inducible nitric oxide synthase (iNOS) inhibitor N-([3-(aminomethyl)phenyl] methyl) ethanimidamide dihydrochloride (1400W) or saline into the DL PAG. Ten minutes later, the animals were tested in the light/dark box and open field. Carboxy-PTIO (1 nmol), L-NAME (200 nmol), TRIM (20 nmol), and 1400W (0,3 and 1 nmol) decreased the anxiogenic-like effects of ethanol withdrawal in rats in the light/dark box test. The NO precursor L-arginine reversed the effects of L-NAME. These results suggest NO production in the DLPAG may play a role in the modulation of ethanol withdrawal-induced anxiety-like behavior in rats. Furthermore, iNOS-mediated NO synthesis in the DLPAG is predominantly involved in the behavioral expression of anxiety-like behavior during ethanol withdrawal.

Idioma: Português Data de Publicação: 2014 Local de Publicação: Maringá, PR Orientador: Prof.ª Dr.ª Rúbia Maria Monteiro Weffort de Oliveira Instituição: Universidade Estadual de Maringá . Centro de Ciências da Saúde . Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas Nível: Tese (doutorado em Ciências Farmacêuticas) UEM: Departamento de Farmácia

Responsavel: edson
Categoria: Aplicação
Formato: Documento PDF
Arquivo: Tese Vivian Taciany.pdf
Tamanho: 2250 Kb (2304372 bytes)
Criado: 17-01-2018 17:53
Atualizado: 17-01-2018 18:01
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