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Consultar: Programa de Ps-Graduao em Cincia de Alimentos

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Ttulo [PT]: Avaliao da diversidade gentica e das caractersticas de virulncia de Escherichia coli isoladas de leite bovino pasteurizado no Estado do Paran
Autor(es): Simone Aparecida Hoffmann
Palavras-chave [PT]:

Escherichia coli produtora de toxina Shiga (STEC). Genes de virulncia. Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence Polymerase Chain Reaction (ERIC-PCR). Repetitive Extragenic Palindromic Sequence Polymerase Chain Reaction (REP-PCR). Leite pasteurizado. Polymerase Chain Reaction (PCR). Paran (Estado).Brasil.
Palavras-chave [EN]:
Escherichia coli Shiga toxin-producing (STEC). PCR (Polymerase Chain Reaction). virulence genes. Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence Polymerase Chain Reaction (ERIC-PCR). Repetitive Extragenic Palindromic Sequence Polymerase Chain Reaction (REP-PCR). Paran. State. Brazil.
rea de concentrao: Funcionalidade e segurana de Alimentos
Titulao: Mestre em Cincia de Alimentos
Banca:
Jane Martha Graton Mikcha [Orientador] - UEM
Adriana Fiorini - UEM
Tereza Cristina R. M. de Oliveira - UEM
Resumo:
Resumo: O leite um alimento muito consumido pela populao, porm devido suas caractersticas intrnsecas ele se torna propicio contaminao e desenvolvimento de micro-organismos patognicos, dentre eles, destaca-se Escherichia coli, que alm de indicar contaminao de origem fecal pode ser patognica. Entre os diferentes patotipos de E. coli que podem causar diarria em humanos, E. coli produtora de toxina de Shiga (STEC) responsvel por surtos de Doena Transmitida por Alimentos (DTA) em diferentes partes do mundo. Em humanos trazem srias implicaes sade, podendo causar desde diarria branda colite hemorrgica, at complicaes extra-intestinais severas como Sndrome Hemoltica Urmica (SHU) e Prpura Trombocitopnica Trombtica. Fatores de virulncia como toxinas de Shiga, intimina e enterohemolisina esto envolvidos na patognese de STEC. Diversos alimentos, tanto de origem animal quanto vegetal, j foram incriminados em surtos de STEC. Em se tratando de leite, embora grande parte dos surtos alimentares causados por STEC estejam ligados ao consumo de leite no pasteurizado e de seus derivados, surtos relacionados ao consumo de leite pasteurizado foram relatados. Mtodos genotpicos como Reao em Cadeia de Polimerase (PCR) tem sido utilizados para estudar a epidemiologia de E. coli bem como para a pesquisa de genes de virulncia por serem rpidos e sensveis. Avaliar a similaridade gentica e pesquisar os genes stx1, stx2, eae, ehxA em E. coli isoladas de leite bovino pasteurizado. Foram analisados 87 isolados de E. coli oriundos de leite bovino pasteurizado proveniente de 22 laticnios localizados na regio Noroeste do estado do Paran. Os isolados bacterianos estavam armazenados a -20C em Tryptic Soy Broth (TSB) com glicerol e tiveram a identificao bioqumica confirmada antes da extrao do DNA, que seguiu o preconizado por Swanenburg et al. (1998) com modificaes. Para o estudo de similaridade gentica empregou-se as tcnicas ERIC-PCR (Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence) e REP-PCR (Repetitive Extragenic Palindromic Sequence). Valores iguais ou maiores que 98% representaram amostras geneticamente idnticas. O poder discriminatrio (D) de ERIC-PCR e REP-PCR foi calculado com base no ndice de diversidade de Simpson. Para a pesquisa dos genes de virulncia utilizou-se a PCR, onde os iniciadores e as condies de amplificao foram especficos para cada gene stx1, stx2, eae, ehxA. ERIC-PCR e REP-PCR diferenciaram os isolados de E. coli em 76 e 81 perfis genmicos respectivamente. Ambos os mtodos mostraram elevada diversidade gentica entre os isolados bacterianos, o que pode ser justificado pelas diversas fontes de contaminao do leite bovino por E. coli. REP-PCR agrupou apenas isolados bacterianos provenientes de mesmas amostras de leite, enquanto por ERIC PCR, isolados de amostras de leite diferentes foram considerados idnticos. Ambas as tcnicas no agruparam isolados bacterianos provenientes de leite processado em laticnios diferentes. No foram detectados os genes de virulncia stx1, stx2, eae, ehxA nos isolados de E. coli analisados, possivelmente pela baixa incidncia desse patgeno em produtos lcteos pasteurizados. Tanto ERIC quanto REP-PCR mostraram alta diversidade gentica de E. coli isolada de leite bovino pasteurizado e os isolados bacterianos no apresentaram os genes stx1, stx2, eae, ehxA, normalmente presentes em STEC. O conhecimento da epidemiologia de E. coli diarreiognicas em leite pasteurizado de fundamental importncia para o entendimento da transmisso, alm de dar subsdios para o desenvolvimento e a implantao de medidas de controle ao longo da cadeia produtiva. A pesquisa de fatores de virulncia de outros patotipos de E. coli importante para avaliar o potencial do leite pasteurizado comercialmente disponvel como veculo de transmisso desta bactria.

Abstract: Although milk is a highly consumed food, its contamination and the development of pathogenic microorganisms due to its intrinsic features are rife. Escherichia coli not only indicates contamination from fecal sources but may also be pathogenic. Among the several pathotypes of E. coli that may cause diarrhea in humans, E. coli as a producer of Shiga toxic (STEC) causes food-transmitted diseases worldwide. Serious implications to health may occur in humans and may range from mild diarrhea to hemorrhagic colitis to severe extra-intestine complication, such as Uremic Hemolytic Syndrome (UHS) and Thrombotic Thrombocytopenic Purpura. Virulence factors, such as Shiga toxins, intimine and enterohemolisin, are involved in STEC pathogenesis and several types of food from animal or vegetal origin cause STEC episodes. Although most food contamination episodes caused by STEC are linked to non-pasteurized milk consumption and its derivates, episodes related to the consumption of pasteurized milk have been reported. Genotype methods such as Polymerase Chain Reaction (PCR) have been employed to study E. coli epidemiology and to research on virulent, fast and sensitive genes.AIMS. Current research evaluates the genetic similarity and research genes stx1, stx2, eae, ehxA in E. coli isolated from pasteurized cattle milk. Eighty-seven isolates of E. coli from pasteurized bovine milk from 22 dairies in the northwestern region of the state of Paran, Brazil, were analyzed. Isolates were stored in Tryptic Soy Broth (TSB, Difco) with glycerol at -20 C, the samples were identified biochemically before extraction of DNA, which was in agreement with Swanenburg et al. (1998), with modifications. Technical enterobacterial repetitive sequence Intergenic Consensus (ERIC-PCR) and sequence repetitive extragenic palindromic (REP-PCR) were used for the genetic similarity. Values equal to or greater than 98% similarity were considered related. The discriminatory power (D) of ERIC-PCR and REP-PCR was calculated using Simpson's diversity index. For the detection of virulence genes was used PCR, primers and amplification conditions were specific to each gene stx1, stx2, eae, ehxA. ERIC-PCR and REP-PCR differentiated the isolates of E. coli genomic profiles 76 and 81, respectively. Analysis of ERIC-PCR and REP-PCR showed high genetic diversity among the isolates of E. coli could be explained by different sources of contamination by E. coli in bovine milk. REP-PCR mustered only bacterial isolates from the same samples of milk, ERIC PCR showed that the isolates from different samples of milk were similar. Both techniques not grouped bacterial isolates from processed milk in dairy different. Were not detected virulence genes stx1, stx2, eae, ehxA in isolates of E. coli analyzed, possibly by the low incidence of these pathogens in pasteurized dairy products. ERIC and REP-PCR revealed a high genetic diversity of E. coli isolated from bovine milk pasteurized and non-detection of genes stx1, stx2, eae, ehxA normally present in STEC in bacterial isolates. Knowledge of the epidemiology of. diarrheagenic E. coli in pasteurized milk is highly relevant to understanding the transmission and provides information for the development and implementation of control measures throughout the production chain. The research on virulence factors in other pathotypes of E. coli is important to evaluate the potential of pasteurized commercially available as vector bacterium analyzed.
Data da defesa: 2013
Cdigo: vtls000208272
Informaes adicionais:
Idioma: Portugus
Data de Publicao: 2013
Local de Publicao: Maring, PR
Orientador: Prof. Dr. Jane Martha Graton Mikcha
Instituio: Universidade Estadual de Maring . Centro de Cincias Agrrias
Nvel: Dissertao (mestrado em Cincias de Alimentos)/
UEM: Programa de Ps-Graduao em Cincias de Alimentos

Responsavel: beth
Categoria: Aplicao
Formato: Documento PDF
Arquivo: Concluso - WORD2 - Cpia.pdf
Tamanho: 717 Kb (733717 bytes)
Criado: 07-10-2013 16:51
Atualizado: 08-10-2013 15:55
Visitas: 936
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